大巖桐SPY同源基因的克隆及功能的初步分析.pdf_第1頁
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1、碩士學位論文論文題目大巖桐大巖桐SPYSPY同源基因的克隆及功能的初步分析同源基因的克隆及功能的初步分析作者姓名鐘丹指導教師龐基良教授學科專業(yè)遺傳學所在學院生命與環(huán)境科學學院提交日期2009年6月杭州師范大學碩士學位論文大巖桐SPY同源基因的克隆及功能的初步分析IIAbstractAbstractGibberellins(GAs)areimptantplanthmonesthathavebeenshowntoparticipateinm

2、oststagesofplantdevelopmentincludingseedgerminationstemelongationflowerfruitdevelopmentsoon.Sinningiaspeciosaisadayneutralplant.Vernalizationisnotrequriedfflowering.Itneedthreetofourmouthfromseedingtoflowering.Resultsofo

3、urpreviousstudyshowedthattheinvitroculturesofperianthcandirectlyregenerateflalbudsinSinningiaspeciosawhenthegibberellincytokininexisted.SPINDLY（SPY）isnotonlyanegativeregulatofgibberellinsignaltransductionbutalsoisapositi

4、veregulatofcytokininsignaling.ToexpletheroleofSPINDLYinflalbuddifferentiationinS.speciosaweclonedthehomogenousgeneofSPYfromSinningiaspeciosa.SPYfunctionhavebeenanalyesed.Mainresearchresultsareasfollows:1.Primersweredesig

5、nedaccdingtotheconservedsequencesinSPYofdifferentplants.OnefulllengthcDNAsnamedSsSPYwasclonedfromwildtypeSinningiaspeciosabyRACE.ThecDNAsequenceofSsSPYwasdepositedinGenBank(GenBankAccessionNumberEU878416).Bioinfmaticsana

6、lysisindicatedthatitcontainsacompletedFbeing2805bpinlengthencodesadeducedproteinof934aminoacid.IthastenTPRdomainrepeatsinNterminal.ComparisonofthissequencewiththoseofPetuniaArabidopsisshowedthatthehomologywas80%76%respec

7、tively.PhylogeicanalysisalsoshowedtheevolutionalconnectionbetweenSsSPYotherSPYhomogenousproteins.2.RTPCRanalysisindicatedthattheSsSPYwasexpressedinthewholeplantincludingrootsstemsleaveyoungflowersbudsbigflowerbudsopenflo

8、werbudsinSinningiaspeciosa.ItillustratedthatSsSPYmaybeplayaimptroleinlifecycleofplant.3.TheoverexpressvectpBI121SPYpBI121TPRhavebeensuccessfullyconstructedbySmaISacIXbaISacIhavebeentransfmedintoagrobacteriumGV3101EHA105.

9、4.WeconfirmedthatthekanamycinflitrationpressureonSinningiaspeciosawas30mgL.TheoverexpressvectpBI121SPYpBI121TPRhavebeentransfmedintoSinningiaspeciosaviaagrobacteriumtransfmedseedlingswereobtained.PCRanalysisindicatedthat

10、thetransfmationefficiencywas22.22%11.11%respectively.5.TheoverexpressvectpBI121SPYpBI121TPRhavebeentransfmedintotobacootransfmedplantswereobtained.PCRRTPCRanalysisindicatedthatthetransfmationefficiencywas95.65%100%respec

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