PP2A抑制劑通過Wnt-β-catenin信號通路抑制胰腺癌細胞株P(guān)ANC-1遷移和增殖的機制研究.pdf

1、目的:
　　斑蝥素(Cantharidin)是傳統(tǒng)抗癌中藥斑蝥的活性成分,且為蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase2A,PP2A)的選擇性抑制劑。PP2A可以使諸多激酶去磷酸化而失活,由于激酶通路的激活通常會促進腫瘤細胞生長,因此PP2A被認為是抑癌因子,而PP2A抑制劑被認為是誘癌劑。然而研究發(fā)現(xiàn)PP2A抑制劑Cantharidin和岡田酸(Okadaic acid,OA)對胰腺癌細胞的生長有顯著抑制作用,而對

2、其遷移的作用尚不清楚。β-catenin是Wnt/β-catenin信號通路的關(guān)鍵蛋白,PP2A可使β-catenin去磷酸化而激活Wnt/β-catenin通路,PP2A抑制劑可促進β-catenin磷酸化而阻斷Wnt/β-catenin信號通路。激活Wnt通路在某些情況下可誘導遷移和增殖,因此在本研究中,我們擬驗證PP2A抑制劑是否通過Wnt/β-catenin通路對胰腺癌細胞的遷移和增殖產(chǎn)生抑制作用。
　　方法:
　　

3、1、用四種不同方式處理 PANC-1細胞,分別為:對照組,PP2A抑制劑處理組, Wnt/β-catenin通路抑制劑處理組,Wnt/β-catenin通路抑制劑與PP2A抑制劑聯(lián)合處理組。
　　2、應用劃痕實驗檢測Cantharidin對胰腺癌細胞株P(guān)ANC-1遷移能力的影響。
　　3、應用Western blot法檢測PP2A抑制劑對Wnt/β-catenin通路的作用。
　　4、應用劃痕和MTT法檢測Cantha

4、ridin、去甲斑蝥素(Norcantharidin)和OA通過Wnt/β-catenin通路對胰腺癌細胞遷移和增殖能力的影響。
　　5、應用基因芯片和real-time PCR技術(shù)檢測Cantharidin和OA對Wnt/β-catenin通路下游基因表達的調(diào)控。
　　結(jié)果:
　　1. Cantharidin可抑制胰腺癌細胞系PANC-1的遷移能力。
　　2. Cantharidin等PP2A抑制劑可介導β-c

5、atenin持續(xù)磷酸化降解,入核減少,提示PP2A抑制劑可下調(diào)胰腺癌細胞中Wnt/β-catenin通路的活性。
　　3. Wnt/β-catenin通路抑制劑FH535能削弱PP2A抑制劑對胰腺癌細胞遷移和增殖的抑制作用,說明PP2A抑制劑對胰腺癌細胞株P(guān)ANC-1遷移和增殖的作用有可能依賴于Wnt/β-catenin信號通路。
　　4. PP2A抑制劑可調(diào)控Wnt/β-catenin通路下游基因的表達。
　　5.