Olomoucine抑制活化星形膠質(zhì)細(xì)胞對brevican、neurocan表達(dá)的影響.pdf

1、目的：研究星形膠質(zhì)細(xì)胞（astrocyte,Ast）活化后，短蛋白聚糖（brevican）、神經(jīng)蛋白聚糖（neurocan）的表達(dá)變化，探討brevican、neurocan在星形膠質(zhì)細(xì)胞活化后的關(guān)鍵作用。
　　方法：采用振蕩培養(yǎng)法結(jié)合差速貼壁法分離純化培養(yǎng)星形膠質(zhì)細(xì)胞，將得到的第三代星形膠質(zhì)細(xì)胞分為三組，分別為對照組、活化組與抑制組。用含10％FBS的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)24小時后的星形膠質(zhì)細(xì)胞，為對照組細(xì)胞；用含10%FBS的D

2、MEM培養(yǎng)基培養(yǎng)24小時后的星形膠質(zhì)細(xì)胞中加入20ng/ml睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子，為活化組細(xì)胞；用20ng/ml睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子加入含10%FBS的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)24小時后，再加入溶于DMSO的100umol/L Olomoucine，為抑制組細(xì)胞。通過免疫熒光化學(xué)法觀察各組細(xì)胞在形態(tài)上的變化。分別在12、24和48小時，應(yīng)用雙位點夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測各組細(xì)胞上清液中brevican、neurocan含量變化，半定量RT

3、-PCR法分析各組細(xì)胞間膠原纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)及 brevican mRNA、neurocan mRNA的表達(dá)變化。
　　結(jié)果：(1)與對照組相比，活化后的星形膠質(zhì)細(xì)胞，數(shù)量明顯增多，胞體變大，突起增加延長，交織成網(wǎng)狀。上清液中brevican、neurocan含量在12、24、48小時隨著時間的延長逐漸增加，與對照組比較有顯著差異（p＜0.05）。GFAP m

4、RNA，brevican mRNA、neurocan mRNA的表達(dá)在12、24、48小時隨著時間的延長也出現(xiàn)明顯增高，與對照組比較有顯著差異（p＜0.05）。
　　(2)應(yīng)用Olomoucine干預(yù)后的抑制組與活化組相比，星形膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量不再增多，胞體變小，突起減少縮短，星形膠質(zhì)細(xì)胞活化被抑制。上清液中 brevican、neurocan含量在12、24、48小時隨著時間的延長逐漸降低，與活化組比較有顯著差異（p＜0.05）。G