子宮內(nèi)膜和單個(gè)胚胎FUT基因表達(dá)的定量分析及LIF因子對(duì)FUT7表達(dá)調(diào)控作用的研究.pdf

1、大連醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文子宮內(nèi)膜和單個(gè)胚胎FUT基因表達(dá)的定量分析及LIF因子對(duì)FUT7表達(dá)調(diào)控作用的研究姓名：張琦申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：燕秋20050601FUT2基因和內(nèi)參GAPDH基因的擴(kuò)增，對(duì)不同循環(huán)數(shù)的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳和微流控芯片技術(shù)檢測(cè)，同時(shí)應(yīng)用Real—TimePCR技術(shù)對(duì)上述基因進(jìn)行分析，并比較三種方法的靈敏度和最低檢測(cè)限度。結(jié)果顯示，F(xiàn)UT2基因瓊脂糖凝膠電泳可檢測(cè)最低限

2、度為25個(gè)循環(huán)的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，而20個(gè)循環(huán)擴(kuò)增的產(chǎn)物無法檢測(cè)到；微流控芯片技術(shù)可以檢測(cè)到稀釋5倍的經(jīng)20個(gè)循環(huán)擴(kuò)增的PCR產(chǎn)物，其靈敏度提高103倍。Real—TimePCR有較高靈敏度和特異性，對(duì)于單胚胎的基因擴(kuò)增可在1888個(gè)循環(huán)檢測(cè)到產(chǎn)物，并可實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)，準(zhǔn)確定量，在重復(fù)性和穩(wěn)定性有明顯優(yōu)勢(shì)。(二)應(yīng)用RealTimePCR技術(shù)對(duì)小鼠受孕不同天數(shù)子宮內(nèi)膜和不同發(fā)育時(shí)期單個(gè)胚胎FUT2基因的表達(dá)進(jìn)行定量分析，并改進(jìn)了單胚胎基因定量分

3、析方法。結(jié)果表明，Real—TimePCR方法可以準(zhǔn)確的對(duì)目的基因進(jìn)行定量，靈敏度高，對(duì)2cell期的單個(gè)胚胎的基因表達(dá)即可進(jìn)行檢測(cè)。FUT2基因在受孕子宮內(nèi)膜和胚胎均有表達(dá)，但孕D4天子宮內(nèi)膜和胚胎都有降低趨勢(shì)，子宮內(nèi)膜拷貝數(shù)約從10“降至10”個(gè)，胚胎拷貝數(shù)約從108降至107個(gè)。結(jié)果尚提示FUT2基因可能與著床前胚胎的發(fā)育成熟及子宮內(nèi)膜接受態(tài)的建立有關(guān)，但具體機(jī)制尚不清楚，其基因表達(dá)量的改變?yōu)檫M(jìn)一步開展其功能研究提供了一定的實(shí)驗(yàn)依

4、據(jù)。(三)對(duì)小鼠不同發(fā)育時(shí)期單個(gè)胚胎表達(dá)FUT基因家族(FUTI，F(xiàn)UT4，F(xiàn)UT7，F(xiàn)UT8，F(xiàn)UT9夕進(jìn)行Real—TimePCR定量分析。結(jié)果顯示：在發(fā)育不同時(shí)期FUTI基因，F(xiàn)UT4基因和FUT7基因的表達(dá)逐漸升高，到桑椹期達(dá)到高峰并持續(xù)至囊胚期；FUT8基因在各發(fā)育時(shí)期的表達(dá)相對(duì)穩(wěn)定，無明顯變化趨勢(shì)；FUT9基因在8cell高表達(dá)，桑椹期和囊胚期開始降低。FUT基因家族各時(shí)期表達(dá)量及變化趨勢(shì)各不相同，但卻和各自合成的相關(guān)寡糖抗