熱休克預處理對大鼠腸缺血-再灌注損傷的保護效應.pdf

1、本文研究目的：探討全身熱休克預處理對腸缺血再灌注(Ischemia/Reperfusion，IR)損傷的保護作用和腸IR損傷的發(fā)生機制。 研究方法：將40只健康雄性SD大鼠隨機分為4組，每組10只。(1)CTRL：正常體溫+假手術對照組；(2)IR：正常體溫+腸IR組；(3)42C：41.5℃～42℃熱休克+假手術組；(4)42IR：41.5℃～42℃熱休克+腸IR組。熱休克預處理為全身加熱使肛溫達41.5℃～42℃，維持10m

2、in；復制腸IR模型為夾閉腸系膜上動脈(superior mesenteric artery，SMA)30min后再灌注60min；假手術組只分離而不夾閉SMA。用Western Blot檢測腸黏膜HSP72蛋白表達；光學顯微鏡觀察腸黏膜形態(tài)學變化；原位末端缺口標記法(TUNEL)檢測腸黏膜上皮細胞凋亡；比色法檢測腸黏膜細胞caspase-3活性；Annexin-V/PI法流式細胞儀檢測外周血白細胞、中性粒細胞(PMN)凋亡比例；草酸銨

3、直接計數(shù)法檢測夾閉前、夾閉30min、再灌注30min、再灌注60min外周血白細胞數(shù)量。用析因方差分析和重復測量方差分析、線性相關的統(tǒng)計學方法，比較上述4組各觀察指標的變化規(guī)律和相關關系。P<0.05為有顯著性差異。 研究結果：(1)與42IR組、42C組、CTRL組相比，瓜組腸黏膜損傷最嚴重；IR組腸黏膜上皮細胞凋亡指數(shù)和腸黏膜細胞caspase-3活性明顯增高(P<0.05)，外周血白細胞、PMN凋亡比例明顯降低；瓜組缺血

4、30min時，外周血白細胞數(shù)量就明顯增高，再灌注后進一步增高，與缺血前比有顯著差異(P<0.05)o(2)經全身熱休克預處理后，大鼠腸黏膜HSP72蛋白表達顯著升高。(3)42IR組與42C、CTRL組之間，各指標(腸黏膜上皮細胞凋亡指數(shù)、腸黏膜細胞caspase-3活性，外周血白細胞、PMN凋亡比例以及外周血白細胞數(shù)量)無明顯差別(P>0.05)。(4)腸黏膜HSP72蛋白的表達水平與外周血白細胞凋亡比例呈正相關(r=0.514，P<

5、0.05)。 (5)腸黏膜細胞caspase-3活性與外周血白細胞凋亡有顯著的負相關(r=-0.764，P<0.01)，與PMN凋亡比例也有顯著的負相關(r=-0.845，P<0.01)。(6)腸黏膜HSP72蛋白的表達水平與腸黏膜上皮細胞凋亡指數(shù)沒有顯著的相關(r=-0.278，P>0.05)，與腸黏膜細胞caspase-3活性值也沒有顯著相關(r=-0.393,P>0.05)。 研究結論：腸缺血-再灌注可導致嚴重的腸黏膜損傷