內毒素誘導的內皮細胞特異性結合肽的篩選及生物信息分析.pdf

1、膿毒癥是指各種致病微生物或其毒素引起的全身炎癥反應綜合征，是嚴重感染、創(chuàng)傷、休克、大手術后等臨床危重患者死亡的主要原因。其發(fā)病機制非常復雜，涉及多種細胞感染、炎癥、免疫功能紊亂、凝血功能障礙及組織損害等一系列問題。膿毒癥進一步可發(fā)展成膿毒性休克和多器官功能障礙綜合征后，治療更困難、預后很惡劣。
　　內毒素(endotoxin)是引起膿毒癥的主要因素，其化學本質為脂多糖(LPS)。在全身炎癥反應綜合征及膿毒癥發(fā)病機制的研究中，目前較

2、為公認的是“二級炎癥反應理論”:LPS首先誘發(fā)單核巨噬細胞產生多種炎癥介質，后者進一步激活單核巨噬細胞、內皮細胞、中性粒細胞等多種效應細胞，并形成瀑布效應，使炎癥反應擴大甚至失去控制，最終導致以細胞自身破壞為特征的全身性炎癥反應。在炎癥反應過程中，LPS激活內皮細胞，進而使凝血和纖溶系統(tǒng)的級聯(lián)反應激活，并通過粒細胞和內皮組織相互作用，促進微循環(huán)障礙惡化。因此，在炎癥反應過程中對內皮細胞進行深入研究和有效干預，則有望減輕炎癥級聯(lián)反應。內皮

3、細胞在受到LPS誘導刺激后，自身的結構和功能發(fā)生改變，導致細胞表面一些與炎癥相關的分子表達增多或暴露其相應的活性結構部位。與正常內皮細胞相比，受刺激的細胞表面存在著數量或/和結構上具有差異的分子，這些分子可能是炎癥級聯(lián)反應時某些重要炎癥介質的結合位點，尋找到這些差異分子的特異性結合肽，則有可能通過競爭性抑制相應炎癥介質與效應細胞的結合，進而中和或阻斷這些炎癥介質的生物學效應，達到阻斷或減輕全身性炎癥反應的發(fā)生。
　　細胞是一個復雜

4、的生物體系，表面分布著大量的信號分子，可反映細胞的特性及所處的功能狀態(tài)。雖然可將這些分子純化作為靶標來篩選細胞特異性的結合肽，但純化這些分子相當困難。而完整細胞篩選不需事先知道有關受體的信息，對某種特定狀態(tài)下細胞膜表面差異分子的篩選非常有利，既可保持細胞表面表達的受體的完整構象和生物學活性，又能充分模擬自然條件下蛋白質分子間的相互作用，從而有效尋找到特異性結合于細胞表面的標志蛋白和鑒定細胞特異標志。但是，由于完整細胞的膜表面抗原密度很低

5、，給抗體篩選帶來了一定難度，也存在非特異性大、背景值高、洗滌過程中特異性配體損失等不利因素，很難獲得針對某一抗原的單鏈抗體。
　　噬菌體展示技術就為尋找這些差異分子的特異性結合肽提供了有效的技術手段。為了解決上述問題，并盡可能接近體內環(huán)境，選用Giordano等新建立的用于細胞差減篩選的“生物淘篩和對篩選出的反應配體的快速分析(BRASIL)”技術，順利地完成了本課題的篩選工作。
　　在分析這些特異性結合肽的同時，成功地建立