玉屏風(fēng)多糖對(duì)PDGF誘導(dǎo)的大鼠HSC的增殖及ERK1-2傳導(dǎo)通路的影響.pdf

1、目的:
　　觀察玉屏風(fēng)多糖(YPF-P)對(duì)血小板衍生生長因子-BB(platelet derivegrowth factor-BB PDGF-BB)刺激大鼠肝星狀細(xì)胞(hepatic stellate cell HSC)增殖、Ⅰ型膠原、Ⅲ型膠原、α-SMA、PDGF-BB、PDGFR-β、磷酸化細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1/2(Phosphorylated extracellular signal-regulated kinase1/2,

2、P-ERK1/2)與c-fos、c-jun表達(dá)的影響,探討YPF-P抗肝纖維化的分子機(jī)制。
　　方法:
　　1.MTT法觀察不同質(zhì)量濃度YPF-P在不同時(shí)間對(duì)PDGF誘導(dǎo)的HSC-T6細(xì)胞增生的影響,篩選出YPF-P的最佳作用時(shí)間及濃度;
　　2.RT-PCR法觀察YPF-P對(duì)PDGF誘導(dǎo)的HSC-T6細(xì)胞的Ⅰ型膠原、Ⅲ型膠原、α-SMA mRNA表達(dá)的影響;
　　3.RT-PCR法觀察YPF-P對(duì)PDGF誘導(dǎo)的

3、HSC-T6細(xì)胞的PDGF-BB、PDGFR-β mRNA表達(dá)的影響;
　　4.Western blot測(cè)定 YPF-P對(duì) PDGF-BB誘導(dǎo)的HSC-T6細(xì)胞的ERK1/2、P-ERK1/2蛋白表達(dá)影響;
　　5.RT-PCR法觀察YPF-P對(duì)PDGF誘導(dǎo)的HSC-T6細(xì)胞的c-fos與c-jun mRNA表達(dá)的影響。
　　結(jié)果:
　　1.YPF-P對(duì)PDGF誘導(dǎo)的HSC-T6增殖作用的影響
　　外源性刺

4、激因子PDGF-BB(10ng/ml)刺激的模型組與不加外源性刺激因子的正常對(duì)照組比較HSC-T6在24h處基本無變化,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而在48、72h處增殖明顯,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,其中以48h增值最為明顯;12.5、25、50、100、200mg/L的 YPF-P作用組與 PDGF-BB刺激組比較均能抑制 PDGF-BB誘導(dǎo)的HSC增殖,隨YPF-P作用濃度增加抑制作用增強(qiáng),其中除12.5mg/L的YPF-P對(duì)HSC的抑制作用不明顯

5、外,其余劑量組均較明顯。
　　2.YPF-P對(duì)PDGF誘導(dǎo)的HSC-T6細(xì)胞Ⅰ型膠原、Ⅲ型膠原和α-SMA mRNA表達(dá)的影響
　　在正常對(duì)照組,HSC-T6細(xì)胞Ⅰ型膠原、Ⅲ型膠原和α-SMA mRNA表達(dá)呈相對(duì)低水平;而模型組Ⅰ型膠原、Ⅲ型膠原和α-SMA mRNA表達(dá)明顯高于正常組(P＜0.01);25,50,100mg/L的 YPF-P組均能明顯抑制升高的Ⅰ型膠原、Ⅲ型膠原和α-SMA mRNA水平,且隨YPF-P濃度

6、的增加抑制作用增強(qiáng)。
　　3.YPF-P對(duì)PDGF誘導(dǎo)的HSC-T6細(xì)胞PDGF-BB和PDGFR-βmRNA表達(dá)的影響
　　在正常對(duì)照組,HSC-T6細(xì)胞PDGF-BB和PDGFR-β mRNA表達(dá)呈相對(duì)低水平;而模型組PDGF-BB和PDGFR-β mRNA表達(dá)明顯高于正常組(P＜0.01);25,50,100mg/L的YPF-P組均能明顯抑制升高的PDGF-BB和PDGFR-β mRNA水平,且隨YPF-P濃度的增加抑

7、制作用增強(qiáng)。
　　4.YPF-P對(duì)PDGF誘導(dǎo)的HSC-T6細(xì)胞ERK1/2及磷酸化的ERK1/2蛋白的表達(dá)的影響
　　PDGF誘導(dǎo)的HSC-T6細(xì)胞磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)表達(dá)較正常對(duì)照組明顯增強(qiáng), ERK通路阻斷劑U0126和YPF-P可降低PDGF誘導(dǎo)的HSC-T6細(xì)胞p-ERK1/2的蛋白表達(dá),U0126和YPF-P聯(lián)合使用作用更加明顯。
　　5.YPF-P對(duì)PDGF誘導(dǎo)的HSC-T6細(xì)胞c-fo

8、s與c-jun mRNA表達(dá)的影響
　　在空白對(duì)照組,HSC-T6細(xì)胞c-fos與c-jun mRNA表達(dá)呈相對(duì)低水平;而模型組c-fos與c-jun mRNA表達(dá)明顯高于正常組(P＜0.01);25,50,100mg/L的YPF-P組均能明顯抑制升高的c-fos與c-jun mRNA水平,且隨YPF-P濃度的增加抑制作用增強(qiáng)。
　　結(jié)論:
　　YPF-P可抑制PDGF-BB誘導(dǎo)的大鼠HSC增殖,Ⅰ型膠原、Ⅲ型膠原和α