PIK3CA基因沉默對(duì)阿司匹林抗骨髓瘤作用的影響及機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　1.通過檢測(cè)阿司匹林（ASA）對(duì)人骨髓瘤細(xì)胞株RPMI-8226細(xì)胞的PIK3CA基因及蛋白表達(dá)的影響，探討PIK3CA基因作為ASA抗骨髓瘤作用靶點(diǎn)的可行性。
　　2.通過沉默PIK3CA基因后檢測(cè)ASA對(duì)RPMI-8226細(xì)胞增殖活性的影響，及其下游效應(yīng)蛋白pAKT的變化，探討PIK3CA基因在ASA抗骨髓瘤效應(yīng)中的作用及分子機(jī)制。
　　方法：
　　1.采用CCK-8方法，檢測(cè)不同濃度ASA（0、

2、2.5、5、10mmol/L）處理RPMI-8226細(xì)胞24h、48h、72h后細(xì)胞增殖變化。
　　2.采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western blot法檢測(cè)不同濃度ASA對(duì)RPMI-8226細(xì)胞PIK3CA基因及蛋白表達(dá)水平。
　　3.利用siRNA干擾技術(shù)，將PIK3CAsiRNA轉(zhuǎn)染RPMI-8226細(xì)胞，熒光顯微鏡下觀測(cè)細(xì)胞轉(zhuǎn)染效果，實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)PIK3CA mRNA表達(dá)以檢測(cè)基因沉默效果。
　　4.

3、采用CCK-8方法，檢測(cè)沉默PIK3CA基因后，ASA處理后RPMI-8226細(xì)胞增殖抑制變化。
　　5.采用流式細(xì)胞儀，檢測(cè)沉默PIK3CA基因后，ASA處理后RPMI-8226細(xì)胞凋亡與周期變化。
　　6.采用Western blot法，檢測(cè)沉默PIK3CA基因后，ASA處理后RPMI-8226細(xì)胞AKT與pAKT蛋白表達(dá)的變化。
　　結(jié)果：
　　1.在2.5～10mmol/L范圍內(nèi)，ASA以劑量依賴性抑制骨

4、髓瘤細(xì)胞株RPMI-8226細(xì)胞增殖。在24～72h內(nèi)，ASA對(duì)RPMI-8226細(xì)胞的增殖抑制率呈時(shí)間依賴性。
　　2.在2.5～10mmol/L范圍內(nèi)，ASA以劑量依賴性抑制RPMI-8226細(xì)胞的PIK3CA基因與蛋白表達(dá)。
　　3.PIK3CAsiRNA轉(zhuǎn)染RPMI-8226細(xì)胞后，PIK3CA基因表達(dá)下降83.2％，表明基因沉默效果較好。
　　4.與對(duì)照組相比，PIK3CAsiRNA轉(zhuǎn)染后，ASA對(duì)RPMI-

5、8226細(xì)胞的抗增殖活性明顯下降，且并不隨ASA濃度增大而變化。
　　5.與對(duì)照組相比，PIK3CAsiRNA轉(zhuǎn)染后，ASA對(duì)RPMI-8226細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)活性明顯下降。
　　6.與對(duì)照組相比，PIK3CAsiRNA轉(zhuǎn)染后，ASA對(duì)RPMI-8226細(xì)胞的G1期阻滯作用明顯下降。
　　7. ASA以劑量依賴性抑制RPMI-8226細(xì)胞pAKT蛋白表達(dá)，但不影響總AKT蛋白表達(dá)。沉默PIK3CA基因后，ASA對(duì)RPMI

6、-8226細(xì)胞pAKT蛋白抑制作用明顯減弱。
　　結(jié)論：
　　1.ASA以濃度依賴性抑制骨髓瘤細(xì)胞株RPMI-8226細(xì)胞的PIK3CA基因及蛋白表達(dá)。
　　2.PIK3CA基因沉默可明顯減弱ASA對(duì)RPMI-8226細(xì)胞的增殖抑制、凋亡誘導(dǎo)效應(yīng)及細(xì)胞周期G1期阻滯作用。
　　3.沉默PIK3CA基因顯著降低ASA對(duì)RPMI-8226細(xì)胞AKT磷酸化的抑制作用。
　　4.ASA通過抑制PIK3CA基因及下游