干擾素膜蛋白(IFITM) Tet-on系統(tǒng)穩(wěn)定細胞系的建立及其抗CA16病毒的初步研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、背景:手足口病是一種常見的兒童傳染性疾病,該病以手、足和口腔粘膜皰疹或破潰后形成潰瘍?yōu)橹饕R床癥狀,可引起少數(shù)患兒產生心肌炎、肺水腫、無菌性腦膜腦炎等并發(fā)癥,病情發(fā)展過快嚴重時會導致患兒死亡,目前仍然沒有有效的預防措施及治療手段。IFITM是一種干擾素誘導產生的抗病毒蛋白,其對多種病毒均具有很好的抑制作用。因此,研究其對手足口病主要病毒CA16的抗病毒作用可為今后的預防及治療提供理論依據(jù)。
　　方法:通過Tet-on調控系統(tǒng),構建

2、了受強力霉素誘導表達 ifitm1/2/3基因的HeLa細胞系,并初步探索了其對柯薩奇病毒A16(CA16)的抑制作用。首先將調控質粒pTet-on轉染進入HeLa細胞,通過G418篩選出陽性克隆細胞系,在此細胞系基礎上共同轉染反應質粒pTRE2-IFITM1/2/3和伴侶質粒pTK-Hyg,通過潮霉素篩選出單克隆細胞系,加入強力霉素后Western Blotting篩選出可誘導表達IFITM1/2/3蛋白的單克隆細胞系。使用實時熒光定

3、量PCR(RT-qPCR)檢測強力霉素誘導表達的IFITM蛋白對不同感染復數(shù)(multiplicity of infection,MOI)的CA16的抑制作用。
　　結果:成功構建了受強力霉素誘導表達的IFITM細胞系,細胞感染不同MOI CA16病毒,Realtime PCR結果顯示IFITM蛋白對CA16病毒具有很好的抑制作用,其中IFITM3的抑制效果最為明顯。
　　結論:Tet調控ifitm1/2/3基因表達HeLa

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