抗顫寧方對(duì)6-OHDA誘導(dǎo)PC-12細(xì)胞損傷的保護(hù)作用研究.pdf

1、目的:通過(guò)對(duì)PC-12細(xì)胞凋亡率，細(xì)胞成活率，及Caspase-3表達(dá)情況的分析研究抗顫寧方對(duì)6-OHDA誘導(dǎo)PC-12細(xì)胞損傷的保護(hù)作用及其可能作用機(jī)制。
　　方法:
　　1.將40只SD大鼠分為30只含藥血清組和10只空白血清組，含藥血清組每只每天灌服濃縮抗顫寧方，早晚各一次，每次2ml，空白血清組每天灌服生理鹽水，劑量同前。一周后，對(duì)40只大鼠腹主動(dòng)脈取血，靜置，離心，過(guò)濾，收集含藥血清及空白血清。
　　2.購(gòu)買(mǎi)

2、PC-12細(xì)胞株，傳代培養(yǎng)細(xì)胞，凍存細(xì)胞備用。當(dāng)PC-12培養(yǎng)處于生長(zhǎng)對(duì)數(shù)期時(shí)，消化，離心，接種在96孔板，設(shè)置六組實(shí)驗(yàn)組，分別為正常細(xì)胞組，中藥高劑量損傷組，中藥中劑量損傷組，中藥低劑量損傷組，空白血清損傷組，對(duì)照損傷組。每組設(shè)6個(gè)復(fù)孔，MTT法檢測(cè)各組細(xì)胞成活率。
　　3.取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)的細(xì)胞接種于6孔板，同樣分為以上六組，每孔設(shè)為一組，分別進(jìn)行流式細(xì)胞儀檢測(cè)早期凋亡率，共檢測(cè)六次，計(jì)算平均值及標(biāo)準(zhǔn)差，分析各組細(xì)胞早期凋亡情況。<

3、br>　　4.取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期PC-12細(xì)胞接種于6孔板，同樣分為以上六組，每組設(shè)一孔，RT-PCR熒光定量檢測(cè)分析各組Caspase-3mRNA表達(dá)情況，檢測(cè)6次，計(jì)算平均值及標(biāo)準(zhǔn)差，統(tǒng)計(jì)分析各組間差異。
　　結(jié)果:
　　1.與損傷組比較，空白血清組吸光值無(wú)明顯差異，與損傷組比較，正常組，中藥高劑量組，中藥中劑量組及低劑量組吸光值有明顯增大。中藥高劑量組與中藥中劑量組吸光值無(wú)明顯差異。
　　2.空白血清組與損傷對(duì)照組早期

4、凋亡細(xì)胞率無(wú)明顯差異，隨著含藥血清濃度的增大，早期凋亡細(xì)胞率逐漸降低。正常細(xì)胞組亦出現(xiàn)早期凋亡細(xì)胞及晚期凋亡細(xì)胞或碎片。
　　3.損傷對(duì)照組，空白血清組Caspase-3mRNA表達(dá)無(wú)明顯差異，隨著含藥血清濃度的增加，細(xì)胞的Caspase-3mRNA表達(dá)逐漸減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論
　　1.抗顫寧方對(duì)6-OHDA誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞損傷具有保護(hù)作用。
　　2.抗顫寧方有抗細(xì)胞凋亡作用，通過(guò)對(duì)凋亡相關(guān)基因C