細胞粘附調(diào)節(jié)基因CARmRNA在肝癌細胞系中的表達及苦參堿體外誘導肝癌分化的實驗研究.pdf_第1頁
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1、浙江大學博士學位論文細胞粘附調(diào)節(jié)基因CARmRNA在肝癌細胞系中的表達及苦參堿體外誘導肝癌分化的實驗研究姓名：王涌申請學位級別：博士專業(yè)：外科學（普外）指導教師：彭承宏20040501乇涌2004年漸趕天掌持_j研究生學靛論文掣‰gYongDissertationforPhD參照國外文獻，設計CAR及actin目l物各一對。PCR擴增產(chǎn)物片段分掰戈CAR318bp，一actin254bp。敬各樣本組RNA蠡霞瓶RTPCR擴增，RT參數(shù)設

2、囂棱麓說秘書，PCR參數(shù)設置螽下：94℃頸交健2min；94℃交髖lmin，60℃遙火30s，72℃堿伸30s，CAR和Bwactin分管擴增，CAR35循環(huán)。Baclin20循環(huán)；再72℃蛙終延攙iomiu，PCR產(chǎn)虢44C絳存。取10rtlPCR擴增產(chǎn)物，以2粥瓊脂糖凝膠電泳，圖像掃描傈j字，用BandLeader(Vet3，00)電泳翻嫌分耩軟囂，辯電泳條帶靜斃密度遴囂分褥，以CAR／一actin鮑光密度比值作為相對定懿，表示CA

3、RmRNA的表達強度。結暴對總RNA用紫外分光光發(fā)計進行檢測，A260／A280I8，證明掇墩的總RNA純菠較意，箢蛋鑫質(zhì)污染。經(jīng)15％串醛交往凝膠魄溶檢溺可見清糍酌18SrRNA蘩l28SrRNA兩條帶。表嘲RNA臻擒競整，無裴顯酶解。PCR擴增產(chǎn)耪電泳顯示，4種細藏祿鰳檢涮翻CARmRNA寢逮。在3I8bp和254bp位讖分別可見CAR和13actin清晰條帶。經(jīng)BandLeader較釋分據(jù)，綏榮顯示正常纛A掰綴藏系L02CARmR

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