基于T細胞表位的HBV DNA疫苗及結核桿菌熱休克蛋白70的佐劑功能的研究.pdf

1、盡管預防性亞單位重組乙肝疫苗和一些治療性藥物在臨床上已經廣泛的應用，乙肝病毒(HepatitisBVirus，HBV)感染目前仍然是嚴重一個威脅人類健康的尚未攻克的疾病。由于DNA疫苗具有誘導體液免疫和細胞免疫的獨特的能力，因此為預防和治療HBV感染提供了一個新的發(fā)展方向。 近年來進行的Ⅰ期臨床實驗結果證明HBVDNA疫苗可以在健康人群中誘導保護性反應；在慢性HBV感染人群中可以誘導特異性的T細胞反應和清除HBVDNA。然而，這

2、些臨床實驗中使用的HBVDNA疫苗只編碼單一的抗原蛋白——S抗原或PreS2/S抗原。而且由于DNA疫苗獨特的抗原表達和遞呈途徑，它的免疫原性仍然需要進一步的改進。因此，我們根據HBV表面抗原(HBsAg)上的T細胞表位，設計了一個包含多個細胞毒性T細胞(CTL)表位和輔助性T細胞(Th)表位的多表位DNA疫苗，并研究了它的功能，同時研究了結核桿菌熱休克蛋白(HeatShockProtein，HSP)HSP70的分子佐劑功能。

3、結果表明，在H-2d和H-2b小鼠模型中，多表位HBVDNA疫苗誘導了一個比單一抗原基因的HBsAgDNA疫苗更強的HBsAg特異性CTL反應。然而，在H-2d小鼠模型中，Dd-限制性表位的CTL反應明顯弱于Ld-限制性表位的CTL反應。HSP70作為分子佐劑可以明顯改善多表位DNA疫苗的有效性。當HSP70融合多表位抗原時，不僅HBsAg抗原特異性的CTL反應被增強了，而且各個表位特異性(Ld、Kd和Kb)的CTL反應也明顯的增強了。

4、在HBV轉基因小鼠模型中，多表位DNA疫苗免疫可以明顯的清除血液中的HBsAg，并顯著下調了HBVDNA的水平。因此，我們的研究表明基于T細胞表位的多表位DNA疫苗在治療慢性HBV感染方面是一個可以考慮的方案。 以往的研究表明，盡管HSP70可以改善DNA疫苗的有效性，但是由于HSP70是一個高度進化保守的分子，因此有引起自身免疫反應的可能性。在這個研究中，我們選擇了兩個截短的HSP70分子——N’-端的HSP701-360和C

5、’-端HSP70359-610，研究它們對于HBVDNA疫苗引起的抗原特異性的免疫反應的調節(jié)作用。實驗結果表明，只有HSP70359-610融合的HBVDNA疫苗誘導了一個增強的HBsAg特異性的抗體反應，同時，這個融合疫苗并沒有誘導HSP70的抗體反應。有趣的是，HSP70359-610不僅僅調節(jié)了HBsAg特異性的CTL反應，還在H-2d小鼠模型中，明顯增強了Ld-限制性表位的CTL反應和Dd-限制性表位的CTL反應。同時，HSP7