組織工程皮膚替代物的研制與應用.pdf

1、目的：研制無細胞毒性豬去細胞真皮基質(PADM)，進行PADM修復深度燒傷創(chuàng)面的實驗研究及臨床觀察；制備成纖維細胞-膠原-PADM復合基質，構建組織工程全層皮膚并進行燒傷創(chuàng)面修復的實驗研究。 方法：1.取0.3-0.4mm厚的豬斷層皮片，使用高滲鹽水/氫氧化鈉法制備PADM，經(jīng)交聯(lián)和消毒后進行細菌學及豬病毒學檢測。PADM植入SD大鼠皮下，術后動態(tài)觀察。SD大鼠背部做全層皮膚缺損，實驗組Ⅰ(高滲鹽水/氫氧化鈉法制備的PADM+自

2、體微粒皮、同種異體皮移植)、實驗組Ⅱ(DispaseⅡ/TritonX-100法制備的PADM+自體微粒皮、同種異體皮移植)，手術后2，4、6周動態(tài)觀察植皮成活情況。在知情同意的前提下，大面積深度燒傷患者切削痂后創(chuàng)面，應用PADM+自體微粒皮+異體皮覆蓋創(chuàng)面，手術后觀察創(chuàng)面愈合情況。2.酶消化法進行表皮細胞和成纖維細胞培養(yǎng)，繪制表皮細胞原代生長曲線，MTT法測定傳代后表皮細胞的增殖。成纖維細胞直接或與膠原混合后種植于PADM表面，構建活

3、性真皮替代物。乩ISA法測定培養(yǎng)液中人TGF-β1、bFGF含量。表皮細胞種植在活性真皮基質的膠原面，構建組織工程皮膚。RT-PCR法檢測氣-液面培養(yǎng)對表皮細胞bFGF、TGF-β1、KGF表達影響。SD大鼠背部全層皮膚缺損，分別進行組織工程皮膚(實驗Ⅰ組)和單純表皮細胞膜片移植(實驗Ⅱ組)的實驗研究。 結果：1.PADM無細胞成分，細菌學和病毒檢測均為陰性。大鼠皮下植入PADM術后24周，仍然可見其結構。2.實驗組Ⅰ、Ⅱ愈合質

4、量無差異，上皮細胞分化良好，膠原纖維排列有序，基底膜完整。PADM結合自體微粒皮和異體皮移植，創(chuàng)面愈合質量明顯優(yōu)于自體微粒皮和異體皮移植的臨床效果。3.成纖維細胞和表皮細胞體外培養(yǎng)均貼壁生長。原代表皮細胞生長速度為包皮組＞頭皮組＞腋窩組，經(jīng)過傳代后不同部位表皮細胞生長增殖無差別(P＞0.05)。4.實驗組Ⅰ的TGF-β和bFGF含量至第8天已經(jīng)達到穩(wěn)定水平，實驗組Ⅱ第4天含量達到穩(wěn)定水平，實驗組Ⅱ的細胞因子含量高于實驗組Ⅰ(P＜0.05

5、)。5.組織工程皮膚具有上皮層和真皮層，表皮細胞之間有橋粒連接。氣-液界面培養(yǎng)獲得的膜片表皮細胞分化良好，bFGF、TGF-β1、KGF基因表達明顯升高。6.組織工程皮膚移植與單純表皮細胞膜片比較，移植物成活率無顯著性差異(P＞0.05)，而收縮率有明顯減低(P＜0.05)，基底膜結構完整。 結論：高滲鹽水/氫氧化鈉法制作的PADM無細胞毒性，可以作為真皮支架在體內(nèi)長時間存在，改善深度創(chuàng)面的外觀及功能。成纖維細胞-膠原-PADM