IR與PPARα-γ在NASH中變化及意義的實驗性研究.pdf

1、非酒精性脂肪肝(Nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)是遺傳-環(huán)境-代謝應激相關因素所致的以肝細胞脂肪變性為主的臨床病理綜合征。伴有炎癥的NAFLD稱為非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic steatohepatitisNASH),約占NAFLD的3％,其中25％可能進展為肝纖維化、肝硬化及肝衰竭,甚至肝細胞癌。目前對于NASH仍無有效的治療方法。有研究證實胰島素抵抗(Insulin Re

2、sistance IR)是NAFLD發(fā)病的主要環(huán)節(jié),它使機體脂質(zhì)代謝平衡紊亂,導致肝細胞內(nèi)脂質(zhì)積聚；然后是氧自由基引起脂質(zhì)過氧化反應及其以瀑布效應誘發(fā)的炎癥反應,因此IR成為當前研究和早期防治NAFLD的熱點。
　　 近年來研究發(fā)現(xiàn),過氧化物酶體增殖物激活受體(Peroxisome proliferator-activated receptors PPARs)在改善IR方面發(fā)揮著極其重要的作用。這種新型的甾體類激素受體,因能被一

3、類脂肪酸樣化合物——過氧化物酶體增殖劑激活而被命名為PP激活受體。根據(jù)其結構及功能可分為3種亞型:PPARα、PPARβ(或稱PPARδ)、PPARγ,在肝細胞內(nèi)PPARα含量較豐富。有實驗表明PPARα是調(diào)節(jié)胰島素敏感性的一個重要因素,它通過對肝內(nèi)脂肪酸氧化和炎癥反應相關基因表達的調(diào)控,在肝臟脂類代謝和炎癥反應中發(fā)揮重要作用。PPARα的激動劑是貝特類藥物,它們在臨床上就是廣泛應用的降甘油三脂的藥物；PPARγ主要表達于脂肪組織,介導

4、脂肪細胞的分化。被活化后,能夠促進前脂肪細胞分化,增強脂肪細胞對胰島素的敏感性,改善機體的胰島素抵抗。胰島素增敏劑噻唑烷二酮類藥物(thiazolidinediones,TZDs)是PPARγ的激動劑；因此,PPARγ激動劑和具有降脂作用的PPARα激動劑都可以改善胰島素抵抗。但鑒于兩類型受體激動劑發(fā)揮作用的部位不同,其產(chǎn)生的效應也有差異。如何找到兩種效應的平衡點以更好地服務于臨床,則是今后研究的核心問題。
　　 因此,我們的研

5、究就是在高脂飲食誘導的脂肪肝胰島素抵抗大鼠模型造模成功后,給予PPARα激動劑非諾貝特和PPARγ激動劑羅格列酮干預,探討它們對肝臟脂肪變的炎癥程度和胰島素敏感性的作用,為進一步認識NAFLD的發(fā)病機制,而合理進行早期防治提供理論及實驗依據(jù)。
　　 目的：
　　 研究PPARs在SD大鼠NAFLD/NASH的形成中的作用,尤其是PPARα、γ,并初步從胰島素抵抗方面探討其機制,為有效防治本病提供新的思路。
　　

6、方法：
　　 1.動物模型的制備
　　 選取雄性(Sprague Dawley)SD大鼠,正常對照組喂飼普通飼料,其蛋白質(zhì)、脂肪、碳水化合物提供能量比分別為21％、19％、60％；高脂組喂飼79％普通飼料+高脂飼料,配方為:1％膽固醇、10％蛋黃粉、10％豬油,其蛋白質(zhì)、脂肪、碳水化合物提供能量比分別為21％、59％、20％,自由進食及飲水。
　　 2.實驗分組
　　 將SD大鼠60只隨機分為正常對照組(

7、NC group,n=20)、高脂對照組(FC group,n=20),高脂加羅格列酮組(FR group,n=10)、高脂加非諾貝特組(FF group,n=10)。飼養(yǎng)12周末時隨機取NC組與FC組各10只-并做高胰島素正葡萄糖鉗夾實驗及肝組織的HE染色,確定造模成功。然后給予羅格列酮、非諾貝特及繼續(xù)高脂飲食干預,共4周。
　　 3.大鼠體重的變化電子天平稱取體重。
　　 4.胰島素敏感性的測定
　　 以高胰

8、島素正葡萄糖鉗夾技術穩(wěn)態(tài)時的葡萄糖輸注率來評價胰島素敏感性。
　　 5.肝臟組織學檢查
　　 采用石蠟切片,蘇木精-伊紅(hematoxylin-eosin HE)染色,光鏡觀察肝臟病理變化。
　　 6. PPARα、γmRNA的表達
　　 用半定量的逆轉錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)檢測PPARα、PPARγ的mRNA表達水平以及羅格列酮對PPARγmRNA和非諾貝特對PPARαmRNA表達水平的影響

9、。
　　 7.血清生化學檢查
　　 取血清樣本,采用全自動血清生化分析儀檢測血脂及轉氨酶等生化指標的含量變化,由河北醫(yī)科大學第二醫(yī)院生化室協(xié)助測定。
　　 結果：
　　 1.各組大鼠體重的變化情況
　　 1.6周末NC組的體重與FF、FR、FC組大鼠相比,有顯著性差異(P<0.01)。FF組體重明顯低于FC組,FR組較FF組有增長趨勢。
　　 2.胰島素敏感性的變化情況
　　 各組

10、之間比較有統(tǒng)計學意義,兩兩比較顯示,NC組明顯高于其它各組,而FF組與FR組均高于FC組,FR組和FF組相比也有差異。
　　 3.HE染色結果顯示
　　 肉眼及光鏡所見NC組大鼠肝臟結構始終大致正常。FC組肝細胞均呈彌漫性脂肪變性,伴有肝細胞壞死和炎性細胞浸潤,并有局部點灶狀壞死,但尚無明顯肝纖維化；FF組脂肪變程度較FC組明顯減輕,未見明顯肝細胞壞死及炎細胞浸潤；而FR組以大泡脂肪變?yōu)橹?FF組病變程度較FR組與FC組

11、均輕。
　　 4.肝臟PPARα mRNA及大網(wǎng)膜PPARγmRNA表達的變化
　　 各組間PPARα的mRNA變化規(guī)律為:FF、NC、FR、FC組表達量依次降低,FF與FR組有統(tǒng)計學意義；大網(wǎng)膜組織的PPARγmRNA表達為FC>FF>NC>FR,FF與FR組也有統(tǒng)計學意義。
　　 5.血脂、血糖及轉氨酶的變化
　　 TG與TC:16周末血中TG的含量在FC組明顯高于NC、FF和FR組(P<0.05),

12、而FF組低于FR組,有統(tǒng)計學意義；TC與TG的變化相似,但在TC中,FF組與FR組比較無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。血糖:四組之間比較無統(tǒng)計學意義,但FC、FF及FR組有高于NC組的趨勢。ALT與AST:血中ALT四組之間比較有顯著差異(P=0.007,<0.01),而FC組與FF、FR組之間無統(tǒng)計學意義(P>0.05),但有降低趨勢；AST的變化與ALT基本相似。
　　 結論：
　　 1.高脂喂養(yǎng)12周末,肝臟組織HE

13、染色觀察到所有動物均出現(xiàn)程度不同的彌漫性肝細胞脂肪變性,小葉內(nèi)和匯管區(qū)有炎細胞浸潤,胰島素敏感性明顯降低,證實大鼠脂肪肝胰島素抵抗模型制備成功。
　　 2.體重、肝臟的脂肪變和炎癥程度與IR呈正相關,表明NAFID與IR可能為因果關系。
　　 3.PPARa的mRNA與IR呈負相關,PPARγmRNA與IR呈正相關,而使用PPARs激動劑后可以改善IR及肝臟的脂肪變、炎癥壞死,使血液中TC、TG降低,認為PPARs激動劑