基于微小RNA表達(dá)機(jī)制探討消腫止痛膏對(duì)骨骼肌損傷后重塑和修復(fù)的影響.pdf

1、目的:基于微小RNA表達(dá)機(jī)制探討消腫止痛膏對(duì)骨骼肌損傷后重塑和修復(fù)的影響
　　方法:
　　第一部分:通過(guò)觀察不同載藥量消腫止痛軟膏對(duì)二甲苯所致的小鼠耳腫脹的消腫作用和對(duì)醋酸所致的小鼠疼痛反應(yīng)的影響，評(píng)價(jià)其消腫鎮(zhèn)痛作用，對(duì)能夠繼續(xù)規(guī)范化應(yīng)用有著重要的臨床價(jià)值、經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)意義。
　　第二部分:基于微小RNA表達(dá)機(jī)制探討消腫止痛膏對(duì)骨骼肌損傷后重塑和修復(fù)的作用機(jī)制。通過(guò)鈍挫傷模型的方法建立大鼠腓腸肌損傷模型，觀察消腫止痛

2、膏對(duì)大鼠損傷后1d、4d、7d外表形態(tài)學(xué)與組織形態(tài)學(xué)變化，結(jié)合損傷后4d、7d、14d、21d大鼠定量PCR檢測(cè)腓腸肌微小RNA-133、MEF2、MyoD mRNA的表達(dá)水平，探討消腫止痛膏對(duì)大鼠腓腸肌鈍挫傷模型的肌肉重塑與修復(fù)的作用機(jī)制。
　　第三部分:探討消腫止痛膏外敷結(jié)合彈性固定治療踝關(guān)節(jié)扭傷疼痛與腫脹的相關(guān)性;比較消腫止痛膏外敷結(jié)合彈性固定與單純“RICE”治療急性踝關(guān)節(jié)扭傷的臨床療效。觀察70例門(mén)急診患者以中藥外敷結(jié)合

3、彈力繃帶固定與單純使用“RICE”治療。采用疼痛視覺(jué)模擬評(píng)分（VAS評(píng)分）、“8”字法踝關(guān)節(jié)腫脹程度測(cè)量、Takakura踝關(guān)節(jié)評(píng)分與中醫(yī)病證診斷療效標(biāo)準(zhǔn)作為評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)。探討患者主觀感受的VAS評(píng)分和腫脹程度測(cè)量數(shù)據(jù)之間具有相關(guān)性，Takakura踝關(guān)節(jié)評(píng)分差異及療效評(píng)價(jià)。
　　結(jié)果:
　　第一部分:①測(cè)定不同載藥量消腫止痛軟膏的消腫作用時(shí)，七厘散組、消腫止痛軟膏中劑量組、消腫止痛軟膏低劑量組腫脹度均小于模型組(P＜0.05)

4、，各組間比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;②測(cè)定不同載藥量消腫止痛軟膏的鎮(zhèn)痛作用時(shí)，七厘散組、消腫止痛軟膏中劑量組的扭體次數(shù)均小于模型組(P＜0.05)。
　　第二部分:從組織病理切片觀察，模型組與治療組損傷后1天、4天、7天等各個(gè)時(shí)間點(diǎn)組織形態(tài)學(xué)損傷評(píng)分均明顯高于空白組(P＜0.01)。治療組在損傷后7天組織形態(tài)損傷評(píng)分明顯低于模型組(P＜0.05)。
　　治療組MEF2的表達(dá)水平顯著高于空白組與模型組，這進(jìn)一步證實(shí)了MEF2在外用

5、藥物中引起骨骼肌重塑及修復(fù)過(guò)程中的重要作用。MEF2在損傷后7天上升，其后表達(dá)一直維持在較高水平，至損傷后21天仍可以表達(dá)出較高水平。與模型組相比較，其表達(dá)的高峰期在14天左右，其后則基本回歸到一般狀態(tài)。MoyD雖然也參與了成肌細(xì)胞的分化及增殖等多個(gè)過(guò)程，其表達(dá)水平與模型組相比并無(wú)明顯改變。
　　在微小RNA表達(dá)方面，損傷后4天，空白組、模型組、治療組無(wú)明顯差異，隨著時(shí)間延長(zhǎng)，模型組與治療組均有所上升，且治療組上升幅度大于模型組，

6、到達(dá)21天，模型組表達(dá)水平已經(jīng)下降，趨于回歸，而治療組水平依然有上升趨勢(shì)。
　　第三部分:治療前、后2組間VAS評(píng)分?jǐn)?shù)據(jù)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;治療中2組間VAS評(píng)分?jǐn)?shù)據(jù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說(shuō)明治療前2組患者疼痛無(wú)差異，具有可比性;治療過(guò)程中，治療組VAS緩解情況較對(duì)照組快。
　　2組治療中、后腫脹程度數(shù)據(jù)均低于治療前，說(shuō)明2組患者腫脹程度均有減輕。治療前腫脹程度無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，說(shuō)明兩組間有可比性。治療中、后，兩組間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，

7、治療組較對(duì)照組腫脹程度緩解更加明顯。
　　患者VAS評(píng)分和腫脹程度之間有相關(guān)性(P＜0.01);以VAS評(píng)分作為因變量，腫脹程度數(shù)據(jù)作為自變量，兩者間線性回歸方程為:Y(VAS)=0.256X（腫脹程度）-4.200，可見(jiàn)兩者之間呈正相關(guān)，隨著VAS的升高，腫脹程度有升高的趨勢(shì)。確定系數(shù)R2=0.407，表示因變量VAS評(píng)分變異中有40.7％可由自變量數(shù)據(jù)變化來(lái)解釋。
　　消腫止痛膏外敷結(jié)合彈性固定治療急性踝關(guān)節(jié)扭傷，療效明

8、顯優(yōu)于單純“RICE”治療。
　　結(jié)論:
　　第一部分:①消腫止痛膏應(yīng)用方便，藥效持久，便于收藏?cái)y帶。
　?、谙[止痛膏高劑量組膏體過(guò)于干硬，涂抹時(shí)與皮膚的貼附性很差，影響藥物有效成分吸收，影響療效。
　?、巯[止痛軟膏對(duì)局部和全身都有良好的消腫鎮(zhèn)痛作用。
　　第二部分:①本實(shí)驗(yàn)采用的造模方法穩(wěn)定、簡(jiǎn)單實(shí)用，各組動(dòng)物損傷程度相當(dāng)，造模后7-21天為骨骼肌損傷的修復(fù)期。
　?、诖笫箅枘c肌損傷后，在自然修

9、復(fù)過(guò)程中，生肌調(diào)節(jié)因子與miRNA-133的表達(dá)水平呈現(xiàn)上升-回落的趨勢(shì)，其中損傷后7-14天，為其表達(dá)的高峰期。在治療組，MEF2與miRNA的表達(dá)水平呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，即使至損傷后21天，其表達(dá)仍未見(jiàn)明顯下降趨勢(shì)，可見(jiàn)消腫止痛軟膏可以促進(jìn)MEF2與miRNA的表達(dá)。
　?、跰oyD雖然也參與了成肌細(xì)胞的分化及增殖等多個(gè)過(guò)程，但其表達(dá)水平與模型組相比并無(wú)明顯差異，MoyD可能與外用藥物導(dǎo)致的骨骼肌再生修復(fù)無(wú)關(guān)。
　?、芟[止痛

10、軟膏可以促進(jìn)MEF2與miRNA的表達(dá)，MEF2與miRNA可以調(diào)節(jié)骨骼肌的再生修復(fù)，因此，消腫止痛膏可以通過(guò)基因調(diào)控，發(fā)揮對(duì)骨骼肌損傷后的再生修復(fù)作用。
　　第三部分:①消腫止痛膏可以改善患者治療過(guò)程中的疼痛情況，雖然在治療后都可以達(dá)到同一水平，但在治療過(guò)程中，治療組優(yōu)于對(duì)照組。
　　②消腫止痛膏可以改善踝關(guān)節(jié)扭傷患者的腫脹程度、踝關(guān)節(jié)功能，其療效明顯優(yōu)于單純RICE療法。
　?、巯[止痛膏治療前、后，患者疼痛與腫脹