新型人生長激素釋放激素類似肽構效關系的研究.pdf

1、南方醫(yī)科大學2 0 1 0 級碩士學位論文新型人生長激素釋放激素類似肽構效關系的研究S t r u c t u r e a n d F u n c t i o n R e l a t i o n s h i po f N e w h G H R HA n a l o g s課題來源：國家自然科學基金( 編號：8 1 0 0 1 3 9 1 )學位申請人導師姓名專業(yè)名稱培養(yǎng)類型培養(yǎng)層次所在學院陳飛周東教授神經(jīng)外科學學術型碩士研究生南方醫(yī)科

2、大學2 0 1 4 年 5 月 6 日 廣州摘要與進展在很大程度上改善了G H R H 上述不足之處，為相關的基礎研究及臨床應用打下基礎。目的選擇前期研究中構建的肽及其二聚體，測定所有九種肽的釋放活性、特異性及受體結合能力，篩選出激素釋放特異和活性最高的G H R H 類似肽或二聚體。方法1 ．將已轉入重組質粒的大腸桿菌B L 2 1 ( D E 3 ) 在L B 培養(yǎng)基中3 7 ' C 3 0 0 r p m發(fā)酵5 小時，加入

3、異丙基．B ．D ．硫代半乳糖苷( I T P G ) 誘導融合蛋白表達5 小時。低溫離心機內4 “ C1 0 0 0 0 r p m 離心5 分鐘收集大腸桿菌，稱重。將收集的表達產(chǎn)物，經(jīng)裂解細胞、洗滌、乙醇沉淀、酸水解、S P ·S e p h a d e xC - 2 5 和S e p h a d e x G - 2 5層析柱等方法純化G H R H ；通過高效液相色譜法分析G H R H 類似肽純度，通過質譜法測定G H

4、 R H 類似肽分子量。2 ．將P r o - P r 0 - h C m R H ( 1 —似) - G l y —G l y - C y s ，P r o ．h G 卸R H ( 1 —描) 一G l y - G l y - C y s和1 P r o - G H R H ( 2 - - 4 4 ) - O l y - G l y - C y s 無菌注射用水溶解后放入P H = l 1 ．5 堿性環(huán)境中二聚體化4 5 小時；3 ．

5、將所得9 中G H R t t 類似肽及標準肽h G H R H ( 1 ．4 4 ) ．N H 2 溶解在乳酸鹽林格氏液( L R B ) 中，將S ．D 雌性大鼠2 5 。C 恒溫常規(guī)飼養(yǎng)后，頸椎脫臼法處死，迅速摘取垂體，用無菌L R B 洗凈，立即浸入3 7 1 2 保溫的無菌L R B 液中進行活性測定。每個垂體放入含有l(wèi) m L 無菌L R B 液的小玻璃管( 1 * 1 0 c m ) 中，3 7 “ C 水浴保溫，每隔1

6、0 m i n 緩慢振搖一次。1 小時后吸取管中液體，立即補加預保溫的新L R B 液l m L ，繼續(xù)保溫1 h 。吸出的液體待測。垂體總共保溫5 小時( 依次以P 1 、P 2 、1 3 、1 4 、1 5 表示連續(xù)的5 h 時間段) ，前兩小時( P 1 、P 2 ) 為空白L R B 緩沖液，后三小時( 1 3 、1 4 、1 5 ) 垂體加入相同濃度的各種人G H R H 肽．L R B緩沖液。以上均在3 7 1 2 保溫的條