Wnt5a在腭發(fā)育及維甲酸誘導腭裂發(fā)生中的表達及其與Shh、FGF-10相關性的研究.pdf

1、背景： 腭裂(Cleft Palate，CP)是口腔頜面部最常見的先天性發(fā)育畸形，占所有先天性畸形的65％左右，全世界新生兒發(fā)生率1/700，在我國發(fā)生率為1.82‰。在已知能誘發(fā)腭裂的環(huán)境因素中，維生素A的衍生物全反式維甲酸(all-trans retinoic acid，atRA)是致畸作用比較顯著的一種，atRA所誘導的腭裂形成的機制尚不明確。小鼠腭裂的發(fā)生形式與人類腭裂發(fā)生非常相似，而小鼠基因與人類的同源性高達99％以上

2、，因此深入了解小鼠腭裂發(fā)生機制將為剖析人類腭裂發(fā)生奠定理論基礎。本實驗應用穩(wěn)定的維甲酸誘導小鼠腭裂模型，觀察正常組和實驗組胚鼠的腭突發(fā)育的形態(tài)學變化；借助免疫組織化學法和分子生物學RT-PCR技術，觀察Wnt5a基因在維甲酸誘導腭裂及正常對照組腭突發(fā)育中的表達和分布的改變，同時檢測信號分子Shh和FGF-10在不同的發(fā)育階段的表達水平變化。 目的： 通過觀察Wnt5a與Shh，F(xiàn)GF-10在正常腭突發(fā)育和腭裂形成中不同發(fā)

3、育階段的表達和分布改變，探討其在腭發(fā)育過程中發(fā)揮的作用以及維甲酸誘導腭裂中的發(fā)生機制；并進一步探索信號分子Wnt5a與Shh，F(xiàn)GF-10之間是否存在相關性。 方法：建立維甲酸誘導的腭裂小鼠模型，采用免疫組織化學技術檢測Wnt5a在胚胎14，15及16天的實驗組和對照組小鼠腭突中的蛋白水平表達和分布變化。采用RT-PCR方法檢測信號分子Wnt5a，Shh和FGF-10在轉錄水平的表達變化。 結果： 1、維甲酸對腭

4、突融合的影響：維甲酸實驗組小鼠腭裂發(fā)生率為100％。HE染色結果顯示：對照組小鼠腭突發(fā)育正常，雙側腭突在中線處接觸融合。實驗組小鼠腭突發(fā)育瘦小，腭突上抬障礙、舌體下降明顯延遲，兩側腭突不能在中線處接觸融合。 2、Wnt5a蛋白表達在腭突發(fā)育各個主要時期的上皮和間充質細胞中，且表達呈時空變化。在ED 15實驗組，Wnt5a的mRNA的表達被上調且高于對照組(P<0.05)。 3、Shh和FGF-10在腭突發(fā)育的不同階段持續(xù)

5、表達，在正常對照組中Wnt5a與Shh、FGF-10表達水平的動態(tài)變化趨勢一致，在實驗組Wnt5a只與FGF-10的變化趨勢具有相關性。 結論： 1、維甲酸作用于小鼠發(fā)育早期，腭突發(fā)育短小、腭突上抬障礙、舌體下降明顯延遲，兩側腭突不能在中線處接觸融合，從而導致腭裂的發(fā)生。 2、Wnt5a參與胚胎腭突的發(fā)生發(fā)育，在腭突發(fā)育過程中的表達具有時空特異性，并與Shh和FGF-10的表達具有相關性。 3、Wnt5a