不同培養(yǎng)代數和接種密度骨髓間質干細胞構建組織工程骨的實驗研究.pdf

1、廣州醫(yī)學院碩士學位論文不同培養(yǎng)代數和接種密度骨髓間質干細胞構建組織工程骨的實驗研究姓名：袁正兵申請學位級別：碩士專業(yè)：外科學指導教師：高梁斌20070501廣州醫(yī)學院碩士學位論文不同培養(yǎng)代數和接種密度骨憾間質干細胞構建組織工程骨的實驗研究方法IMSCs細胞形態(tài)學觀察：應用Percoll細胞分離液對兔骨髓行密度離心，分離得到MSCs并傳代，觀察各代MSCs生長狀況；取第四代MSCs行成骨分化誘導培養(yǎng)，觀察MSCs在成骨分化條件下的生長狀況

2、，分別行改良的Kaplow法染色和改良的YonKossa法染色，檢測MSCs成骨分化誘導培養(yǎng)后堿性磷酸酶的表達和鈣化節(jié)結的形成。2第1—5代MSCs增殖能力檢測：應用四唑鹽(MTT)比色法檢測第l一5代MSCs傳代培養(yǎng)后各時間點的oD值，采用統(tǒng)計學方法比較各代MSCs的增殖能力。3第l一5代MSCs成骨分化能力檢測：應用堿性磷酸酶(ALP)測定試劑盒檢測第l一5代MSCs成骨分化誘導培養(yǎng)后的ALP活性，采用統(tǒng)計學方法比較各代MSCs的成

3、骨分化能力。4術后大體觀察和影像學檢查：取第4代的同種異體MSCs進行成骨分化誘導培養(yǎng)，配成025106、05X106、1X106、2i06和4i06／m1五個接種密度組，并以培養(yǎng)液作為空白對照組，體外構建組織工程骨，完全隨機化植入雙側橈骨中段節(jié)段性骨缺損動物模型。術后進行大體觀察，并在第2、4、8和12周拍前肢側位片，觀察各組的骨缺損修復情況并評分，采用統(tǒng)計學方法比較不同接種密度構建的組織工程骨骨缺損修復效果。5組織工程骨生物力學檢測

4、：術后第12周取出橈骨標本，立即在生物力學實驗機上進行三點彎曲，檢測最大載荷，采用統(tǒng)計學方法比較不同接種密度構建的組織工程骨體內成骨后的生物力學性能。6組織工程骨組織形態(tài)學觀察：標本行HE染色，觀察各組標本支架材料的吸收和骨缺損的愈合情況，比較不同接種密度構建的組織工程骨正位成骨效果。結果1MSCs細胞形態(tài)學改變：密度離心法分離得到的MSCs形態(tài)較為一致，長梭形樣，呈單層、漩渦樣生長，未見復層生長，第2代以后細胞形態(tài)更為一致，傳代至第5