磁感慶熱療聯(lián)合hR3體外干預人食管癌細胞生長.pdf

1、目的：探討磁性納米顆粒Fe3O4磁場熱療聯(lián)合尼妥珠單抗干預人食管癌細胞株的影響。
　　 方法： Western blot檢測人食管癌高分化細胞株TE-1、低分化細胞株Eca109的EGFR表達狀況，普魯士藍染色法觀察磁性納米顆粒Fe3O4與細胞共同孵育后的細胞形貌，MTT和CellTiter-Glo分別檢測磁性納米顆粒、hR3、不同濃度磁性納米顆粒聯(lián)合hR3作用于TE-1、Eca109后細胞活力，磁感應熱療作用于TE-1、Eca

2、109細胞后光學顯微鏡下細胞形態(tài)變化，磁感應熱療、hR3單一或聯(lián)合作用于TE-1、Eca109細胞后熒光顯微鏡觀察凋亡、流式細胞技術檢測凋亡，RT-PCR、western blot分別檢測不同措施處理后bax、bcl-2、PCNA、HSP70 mRNA、蛋白水平。
　　 結果：人食管癌高分化細胞株TE-1呈EGFR低表達(EGFR/β-actin=0.12)，低分化細胞株Eca109呈EGFR高表達(EGFR/β-actin=0

3、.52)；磁性納米顆粒Fe3O4與細胞共同孵育，光鏡下細胞形態(tài)未變化，胞內(nèi)明顯存在Fe3O4，隨納米顆粒濃度增加，胞內(nèi)Fe3O4顯著增加；0-2mg/ml濃度范圍磁性納米顆粒單獨及與聯(lián)合hR3培養(yǎng)24h后，MTT顯示，隨粒子濃度升高細胞活力顯著升高，而CellTiter-Glo則顯示，隨粒子濃度升高細胞活力顯著降低，提示兩種實驗結果均存在由Fe3O4所致明顯系統(tǒng)誤差；不同濃度磁感應熱療后，光學顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)TE-1、Eca109細胞變形

4、、皺縮，且隨粒子濃度增加細胞形態(tài)變化增加；DAPI染色提示不同處理因素作用于TE-1、Eca109細胞，隨著粒子濃度增加，細胞凋亡率明顯增加，F(xiàn)e3O4聯(lián)合hR3組較單-Fe3O4以及單一hR3組有增加；不同處理因素作用于細胞后，流式細胞儀檢測凋亡顯示Eca109/TE-1對照組、hR3組、磁感應熱療組、hR3+磁感應熱療組凋亡率分別是2.2±0.36/4.9±0.28、3.6±0.29/5.3±0.14、3.6±0.29/5.3±0.

5、14、2.5±0.32/6.2±0.22，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.5)；RT-PCR、western blot提示不同處理因素處理后bax mRNA、蛋白水平升高，bcl-2、PCNA、HSP70 mRNA、蛋白水平均降低，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.5)。
　　 結論：人食管癌低分化細胞株Eca109呈EGFR高表達，高分化細胞株TE-1呈EGFR低表達。Fe3O4可被人食管癌細胞吞噬，對其形態(tài)卻無明顯影響。MTT法和Ce