揚(yáng)子毛茛活性部位提取工藝及藥效學(xué)研究.pdf

1、目的:1.探索揚(yáng)子毛茛(YangZiMaoGen，YZMG)抗炎活性部位的最佳提取工藝。2.觀察YZMG最佳提取工藝所得提取物對疼痛和炎癥模型的鎮(zhèn)痛和抗炎作用。
　　方法:1.采用正交設(shè)計(jì)，以乙醇濃度、溶劑體積、提取時(shí)間為考察因素，以尿囊素的含量為評價(jià)指標(biāo)優(yōu)選最佳提取工藝。采用二甲苯致小鼠耳腫脹實(shí)驗(yàn)來驗(yàn)證不同提取物對小鼠的抗炎作用與尿囊素含量的相關(guān)性。分別采用蘇木精-伊紅(HE)染色法在電鏡下觀察炎癥細(xì)胞的浸潤程度、紫外分光光度法

2、、酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)探索YZMG不同提取物對炎癥小鼠血液中前列腺素E2(PGE2)、白介素-6(IL-6)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的含量的影響以驗(yàn)證最佳提取工藝。2.應(yīng)用非特異性炎癥模型腹腔毛細(xì)管通透性實(shí)驗(yàn)以及經(jīng)典的疼痛模型熱板法和醋酸所致扭體實(shí)驗(yàn)來觀察YZMG的抗炎鎮(zhèn)痛活性。
　　結(jié)果:1.通過正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)選的最佳提取工藝為90％的乙醇以12倍(V/m)體積回流提取1.5 h。通過藥效學(xué)驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)，正交實(shí)驗(yàn)所得最佳

3、提取工藝組能降低小鼠耳腫脹度，與模型組比較，差異非常顯著，其對耳腫脹的抑制率最大。含量較低的Ⅲ號、Ⅵ號、Ⅶ號、Ⅷ號提取方案組可降低小鼠耳腫脹度，與模型組比較，差異顯著，抑制率比最佳提取工藝組低。而含量最低的Ⅰ號、Ⅳ號、Ⅴ號、Ⅸ號提取方案組與模型動物空白對照組比較，差異無顯著性。根據(jù)正交試驗(yàn)結(jié)果，對尿囊素的含量與耳腫脹抑制率做相關(guān)性分析，相關(guān)系數(shù)為0.816，P＜0.001，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，尿囊素含量與耳腫脹抑制率之間存在直線相關(guān)關(guān)系。

4、通過在鏡下觀察藥物對模型動物耳片病變的影響，發(fā)現(xiàn)YZMG最佳提取工藝組對小鼠耳片組織的炎性細(xì)胞浸潤程度的抑制作用最強(qiáng)，此組動物炎癥組織中炎癥細(xì)胞的數(shù)量最少。Ⅲ號、Ⅵ號、Ⅶ號、Ⅷ號提取方案組，對小鼠耳片組織的炎性細(xì)胞浸潤程度的抑制作用比最佳提取工藝組小。通過各組對炎癥細(xì)胞因子PGE2、IL-6、TNF-α的影響發(fā)現(xiàn)，最佳提取工藝組對3種細(xì)胞因子生成的抑制作用最強(qiáng)。2.最佳提取工藝所得提取物的高(10 g·kg-1)、中(5 g·kg-1)

5、、低（2.5g·kg-1）劑量組均可明顯拮抗由熱刺激和醋酸誘導(dǎo)（量效關(guān)系明顯）的疼痛反應(yīng)。高、中劑量組對冰醋酸所致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性有抑制作用，與模型組比較，差異具有顯著性。低劑量組與模型組比較，差異無顯著性。
　　結(jié)論:通過對各種提取物抗炎活性的驗(yàn)證，得出此最佳提取工藝方案可行，抗炎活性較強(qiáng);最佳提取工藝所得提取物具有較強(qiáng)的抗炎鎮(zhèn)痛活性，其抗炎作用機(jī)制可能與減少PGE2、 IL-6及TNF-α的生成有關(guān)，且尿囊素為YZMG抗