肝癌及癌旁肝組織的高爾基體差異蛋白質(zhì)分析.pdf

1、目的：建立一種行之有效的肝癌及癌旁肝組織高爾基體比較蛋白質(zhì)組學研究方法。篩選并鑒定肝癌及癌旁肝組織高爾基體蛋白質(zhì)組中差異表達的蛋白質(zhì)，從高爾基體層面解釋肝癌的發(fā)生發(fā)展機制，為肝癌的早期診斷和抗癌藥物的研發(fā)提供線索。
　　 方法：應用亞細胞比較蛋白質(zhì)組學研究方法，比較分析肝癌及癌旁肝組織高爾基體蛋白質(zhì)組。收集肝癌患者手術切除的癌組織和癌旁肝組織標本，蔗糖密度梯度離心法分離純化高爾基體。建立并優(yōu)化兩種組織高爾基體的雙向電泳方法，銀染

2、后用PD-Quest軟件分析找出差異表達的蛋白質(zhì)點，然后用質(zhì)譜儀獲取相應蛋白點的肽質(zhì)指紋圖譜，聯(lián)網(wǎng)到Swiss-Prot蛋白質(zhì)組數(shù)據(jù)庫鑒定獲得的差異蛋白質(zhì)點，最后用Western blot驗證雙向電泳結果。蛋白質(zhì)相對表達量的比較采用配對t檢驗。
　　 結果：有效的分離出了高純度的高爾基體，應用雙向凝膠電泳獲得了分辨率和重復性均較好的雙向電泳銀染圖譜。肝癌組織和癌周肝組織平均每張蛋白斑點數(shù)分別為（1153±49）個和（1086±3

3、7）個，與癌旁肝組織高爾基體蛋白質(zhì)組相比，肝癌組織高爾基體蛋白質(zhì)組有27個蛋白位點表達上調(diào)，20個蛋白位點表達下調(diào)。通過數(shù)據(jù)庫搜索，初步鑒定出了其中17個蛋白質(zhì)，并用Western blot從蛋白水平上驗證了雙向凝膠電泳結果。
　　 結論：肝癌及癌旁肝組織高爾基體蛋白質(zhì)組具有不同的蛋白質(zhì)位點，這些差異表達的蛋白質(zhì)涉及到細胞的能量代謝、腫瘤的侵襲和轉移，細胞周期調(diào)控等方面，為進一步闡釋高爾基體在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中所起的作用提供了有價