干預FANCF基因對人卵巢癌OVCAR3細胞生物學特性的影響.pdf

1、前言：FANCF作為FA/BRCA通路的重要調控蛋白,參與正常細胞DNA修復、細胞周期與凋亡調控、解毒功能調節(jié)、生命信號轉導等。如果FA/BRCA通路受損會導致細胞染色體不穩(wěn)定以及對DNA損傷劑高度敏感。FA復合體的穩(wěn)定和FANCD2的泛素化激活是FA/BRCA通路的關鍵步驟,如果FANCF蛋白低表達或功能缺失,則會干擾FA/BRCA通路的正常功能,進而參與腫瘤的發(fā)生與發(fā)展。目前,已在多種實體腫瘤中證實:FANCF蛋白低表達或功能缺失,

2、與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展相關。而關于。FANCF是否參與卵巢癌發(fā)生、發(fā)展尚未見報道。
　　 本實驗以FANCF基因為靶點,研究FANCF基因沉默對卵巢癌OVCAR3細胞生物學特性的影響,并檢測相關指標的變化,探討FANCF基因是否參與卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展的調控,為卵巢癌發(fā)生、發(fā)展的研究提供新的思路。
　　 方法：應用小提中量試劑盒提取質粒,脂質體法轉染到人卵巢癌OVCAR3細胞中,RT-PCR法及Western blot法檢測F

3、ANCF基因mRNA及蛋白表達水平,確認OVCAR3-FANCF-RNAi細胞模型構建成功;分別采用MTT法、流式細胞儀PI單染法及AnnexinV-FITC/PI雙染法檢測FANCF基因沉默前后細胞增殖、周期及凋亡等生物學特性的變化。
　　 結果：
　　 一、成功構建OVCAR3-FANCF-RNAi細胞模型:與陰性對照組相比,轉染FANCF-shRNA質粒后,FANCF基因mRNA及蛋白表達水平均明顯降低,轉染后24

4、h、48h及72h,FANCF mRNA表達抑制率分別為28.66％±5.91％、47.97％±10.91％、58.80％±11.10.80％(P＜0.05);蛋白表達抑制率分別為23.51±5.46％,33.24％±6.85％,38.65％±8.26％(P＜0.05),說明干預FANCF基因48h、72h時能顯著抑制mRNA及蛋白表達,OVCRA3-FANCF-RNAi細胞模型成功建立。
　　 二、FANCF基因沉默對卵巢癌O

5、VCAR3細胞生物學特性的影響:
　　 1、FANCF基因沉默對人卵巢癌OVCAR3細胞增殖的影響:與陰性對照組相比,FANCF基因沉默后,細胞增殖明顯受到抑制。轉染后48h和72h,細胞增殖抑制率分別為28.92％±6.81％、40.72％±8.63％(P＜0.05)。
　　 2、FANCF基因沉默對人卵巢癌OVCAR3細胞周期的影響:與陰性對照組相比,FANCF基因沉默后,細胞S期比例明顯增加。轉染后48h和72h,

6、OVCAR3細胞S期比率分別為29.14％±6.26％、33.52％±7.72％(P＜0.05)。
　　 3、FANCF基因沉默對人卵巢癌OVCAR3細胞凋亡的影響:與陰性對照組相比,FANCF基因沉默后,細胞早期凋亡及晚期凋亡均明顯增加,轉染后48h和72h,OVCAR3細胞凋亡率分別為25.90％+4.12％、37.78％±9.16％(P＜0.05)。
　　 結論：FANCF基因沉默可抑制卵巢癌OVCAR3細胞增殖,