非小細胞肺癌95D細胞株目的microRNA的篩選及l(fā)et-7a體外調控95D細胞侵襲能力的實驗研究.pdf

1、第一部分、目的microRNA的篩選和let-7a在肺癌組織中的表達
　　 目的：篩選非小細胞肺癌95D細胞株的目的microRNA。
　　 方法：通過對CpG ODN刺激前后的非小細胞肺癌95D細胞株進行microRNA的基因芯片檢測，篩選出變化幅度最大的microRNA。用Real-time PCR方法檢測和驗證目的microRNA在20例非小細胞肺癌患者肺癌組織和正常肺組織標本中的表達情況。
　　 結果：經

2、CpG ODN刺激后，絕大部分microRNAs表達水平出現(xiàn)下調，其中l(wèi)et-7a的下調幅度最大(達6.9倍)。70％肺癌組織標本(14/20例)中l(wèi)et-7a的表達低于正常肺組織，肺癌組織中l(wèi)et-7a的整體表達明顯低于正常肺組織，僅為后者的60％，差異具有統(tǒng)計學意義。
　　 結論：確定let-7a為非小細胞肺癌95D細胞株的目的microRNA，并進行下游實驗。
　　 第二部分、let-7a慢病毒載體的構建與鑒定

3、r>　　 目的：構建let-7a慢病毒載體并進行鑒定。
　　 方法：分別構建let-7a mimics和let-7a inhibitor慢病毒載體并包裝。測定慢病毒滴度，并進行靶細胞侵染實驗。
　　 結果：慢病毒測序正確。當慢病毒滴度為1×108TU/ml時，侵染靶細胞(95D細胞)的效率可達到95％左右，符合實驗要求。RT-PCR檢測證實，轉染let-7a mimics慢病毒載體的95D細胞表達高水平的let-7a，

4、而轉染let-7a inhibitor慢病毒載體的95D細胞表達低水平的let-7a，兩者差異具有統(tǒng)計學意義。
　　 結論：let-7a慢病毒載體構建成功。
　　 第三部分、let-7a對非小細胞肺癌95D細胞株增殖和侵襲能力的影響及分子機制探討
　　 目的：觀察let-7a對95D細胞增殖及侵襲能力的影響，并探討可能的分子學機制。
　　 方法：將95D細胞株分為let-7a過表達組(轉染let-7a m

5、imics慢病毒載體)和let-7a抑制組(轉染let-7a inhibitor慢病毒載體)。通過細胞增殖實驗和Transwell實驗觀察和比較let-7a對上述兩組細胞增殖與侵襲能力的影響。應用Real-time PCR及Western blot法分別檢測和比較上述兩組細胞在mRNA和蛋白水平表達KRAS和HMGA2基因的情況。
　　 結果：let-7a過表達組的細胞增殖和侵襲能力明顯低于let-7a抑制組，差異具有統(tǒng)計學意義