維生素A、E對(duì)人血清培養(yǎng)食管癌細(xì)胞Eca-109增殖活性的影響.pdf

1、目的： 研究維生素A、E對(duì)人血清培養(yǎng)人食管癌細(xì)胞Eca-109增殖活性的影響，并探討其作用機(jī)制。 方法： 1．用滅活和非滅活人血清(3％、5％、10％、15％)，培養(yǎng)人食管癌細(xì)胞Eca-109，通過MTT比色法、細(xì)胞倍增時(shí)間和細(xì)胞克隆形成率的計(jì)算，觀察血清是否滅活和不同血清濃度對(duì)細(xì)胞增殖的影響。 2．在含5％未滅活人血清的培養(yǎng)液中加入不同濃度的維生素A，通過MTT比色法、細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)、<'3>H-TdR

2、摻入實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞流式術(shù)檢測(cè)方法觀察維生素A對(duì)細(xì)胞增殖活性的影響。 3．在含5％未滅活人血清的培養(yǎng)液中加入不同濃度的維生素E，通過細(xì)胞生長曲線和細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)觀察維生素E對(duì)細(xì)胞增殖活性的影響。 4．在含5％未滅活人血清的培養(yǎng)液中加入不同濃度的維生素A和E，用細(xì)胞生長曲線觀察維生素A和E對(duì)細(xì)胞增殖活性的協(xié)同效應(yīng)。 5．用食管癌患者血清培養(yǎng)人食管癌細(xì)胞Eta-109，通過細(xì)胞生長曲線、倍增時(shí)間和<'3>H-TdR摻入實(shí)驗(yàn)，

3、觀察其對(duì)細(xì)胞增殖的影響。 結(jié)果： 1．從MTT比色法、細(xì)胞倍增時(shí)間和克隆形成率的結(jié)果來看，未滅活人血清濃度為5％細(xì)胞生長較好，滅活人血清最佳濃度是10％。濃度為15％時(shí)不論滅活與否細(xì)胞生長均受抑制。任何條件下，人血清組細(xì)胞生長均好于小牛血清組。 2．從MTT比色法、細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)、<'3>H-TdR摻入實(shí)驗(yàn)以及細(xì)胞流式術(shù)結(jié)果可見，維生素A能抑制人食管癌細(xì)胞Eca-109的增殖，影響細(xì)胞DNA的合成，阻止細(xì)胞進(jìn)入有絲

4、分裂狀態(tài)。 3．從MTT比色法、細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)的結(jié)果可見，維生素E對(duì)人食管癌細(xì)胞Eca-109的增殖無明顯的抑制作用。 4．從細(xì)胞生長曲線可見，維生素A、E對(duì)人食管癌細(xì)胞Eca-109的增殖沒有協(xié)同作用。維生素E并沒有增強(qiáng)或減弱維生素A的作用效果。 5．從細(xì)胞生長曲線、倍增時(shí)間和<'3>H-TdR摻入實(shí)驗(yàn)結(jié)果可見，放化療后有效的食管癌患者血清對(duì)細(xì)胞生長有一定抑制作用。新發(fā)食管癌患者血清濃度在5％、10％、15％均能

5、適應(yīng)人食管癌細(xì)胞Eca-109生長的要求，而鹽亭和成都地區(qū)正常人血清濃度只在5％時(shí)能滿足要求，過高則抑制生長。 結(jié)論： 1．用人血清可代替小牛血清培養(yǎng)人食管癌細(xì)胞Eca-109，培養(yǎng)時(shí)選擇5％未滅活人血清較合適。 2．維生素A能抑制人食管癌細(xì)胞Eca-109的增殖，存在劑量—反應(yīng)關(guān)系。其機(jī)制可能為維生素A使細(xì)胞積聚于S期，破壞其DNA合成，使其不能通過G<，2>/M調(diào)控點(diǎn)，抑制細(xì)胞增殖。 3．維生素B對(duì)人