基因工程創(chuàng)建無側芽煙草的初步研究.pdf

1、打頂抹芽是優(yōu)質烤煙種植過程中一項重要的生產技術措施。煙草在一定的生長時期必須打頂，而打頂后會萌生大量的側芽。側芽耗費營養(yǎng)，會降低煙葉的品質和產量，因此必須抹掉側芽。人工抹芽耗費人力和物力，提高了煙葉生產成本。打頂后施用化學藥劑可抑制腋芽生長，降低了煙葉生產勞動強度。但化學藥劑需要成本，且會造成環(huán)境污染。用基因工程方法創(chuàng)建無側芽的煙草，則有可能從根本上解決上述問題。 陳興江(2005)根據(jù)番茄LS基因進行同源克隆了煙草TLS基因的

2、部分片段749bp，與番茄的LS氨基酸序列同源性達92％，利用傷誘導啟動子構建的TLS基因的RNAi載體并轉化煙草，可能因TLS基因在愈傷組織中的表達受到抑制而無法得到再生芽. 本研究通過間接誘導途徑對其方案進行完善，首先從pOpOn2.1載體克隆了轉錄因子LhG4，構建了一個組成型的花椰菜花葉病毒35S啟動子表達轉錄因子LhG4的表達載體，同時構建了一個LhG4能識別結合的pOp6啟動子的RNAi-TLS表達載體：由于陳興江所

3、構建載體的酶切位點無法與pOpOffl的多克隆位點匹配，所以先根據(jù)已知序列擴增了TLS基因，通過Gateway技術，BP、LR反應后將其最終克隆到pOpOffl載體上，構建了.POP6啟動子的TLS的RNAi載體。然后將這兩個載體分別進行煙草轉化。轉基因成功后將這兩個轉基因材料進行人工授粉雜交，其F1即有望獲得無側芽煙草。目前，利用這兩個載體轉化煙草的部分工作已經(jīng)進入壯苗培養(yǎng)階段。 我們擬利用傷誘導基因AOS的啟動子替換組成型的