鹽酸小檗堿對Jurkat細胞凋亡及Survivin基因表達的影響.pdf

1、急性淋巴細胞白血病(ALL)是源于單個B或T淋巴細胞前體細胞的惡性腫瘤。ALL好發(fā)于兒童及青少年，在兒童中預(yù)后較好，在成人中，使用標準化療方案往往可以實現(xiàn)首次緩解，但是復(fù)發(fā)率高達70-80％，傳統(tǒng)化療藥物對正常組織特別是造血系統(tǒng)的毒性作用限制了化療藥物的使用劑量，因此尋求高效低毒的治療手段成為目前研究的熱點。
　　小檗堿可以從中藥黃連、黃柏和三顆針等小檗屬植物中提取，現(xiàn)代研究表明小檗堿對多種實體腫瘤及血液系統(tǒng)腫瘤均表現(xiàn)出抗腫瘤活性

2、，其主要作用為誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡，細胞周期阻滯，抑制腫瘤新生血管生成，而對正常組織副作用小。
　　本實驗主要研究鹽酸小檗堿對人白血病Jurkat細胞細胞增殖、細胞凋亡、細胞周期及Survivin基因表達是否存在影響。我們采用了改良MTT法測定Jurkat細胞的IC50及細胞毒作用，Hoechst33342熒光染色法觀察細胞核的變化，流式細胞術(shù)AnnexinV-FITC+PI法檢測細胞凋亡，PI單染法檢測細胞周期，半定量RT-PCR法

3、檢測Survivin基因表達。結(jié)果顯示，在0-10μg/ml藥物濃度范圍，Jurkat細胞的生長是明顯受抑制的，隨著鹽酸小檗堿濃度增大Jurkat細胞生長率逐漸減低，說明鹽酸小檗堿對Jurkat細胞的抑制作用呈濃度依賴性。鹽酸小檗堿24小時、48小時、72小時作用Jurkat細胞的IC50值分別為:6.94μg/ml、3.94μg/ml、2.45μg/ml，說明鹽酸小檗堿對Jurkat細胞的生長抑制作用亦呈時間依賴性。0μg/ml及5μ

4、g/ml鹽酸小檗堿作用于Jurkat細胞48小時后，通過Hoechst染色，Jurkat細胞細胞核出現(xiàn)凋亡改變:細胞核變形，核質(zhì)濃縮，并出現(xiàn)凋亡小體。AnnexinV-FITC+PI法檢測鹽酸小檗堿對Jurkat細胞凋亡后發(fā)現(xiàn)，0，0.1，0.5，1，5，10μg/ml鹽酸小檗堿處理Jurkat細胞48h后，早期凋亡細胞比例分別為:2.06％±0.51％，3.60％±1.05％，3.38％±1.37％，3.97％±1.53％，12.77