骨肉瘤中ATF3基因調節(jié)P53鞠躬小分子化合物RITA誘導的細胞凋亡的機制研究.pdf

1、中圖分類號UDC61O碩士學位論文學校代碼10533骨肉瘤中ATF3基因調節(jié)P53靶向小分子化合物RITA誘導的細胞凋亡的機制研究ThestudyofP53targetedsmallmolecularcompoundsRITAinducedapoptosisregulatedbyATF3inosteosarcoma作者姓名：李驍寧學科專業(yè)：臨床醫(yī)學研究方向：外科學學院(系、所)：湘雅二醫(yī)院指導教師：王萬春教授答辯委員會主噼中南大學二O一

2、四年五月骨肉瘤中ATF3基因調節(jié)P53靶向小分子化合物RITA誘導的細胞凋亡的機制研究摘要目的：骨肉瘤(osteosarcoma)是較常見的發(fā)生在20歲以下的青少年或兒童的一種惡性骨腫瘤，在小兒骨惡性腫瘤中最多見，約為小兒腫瘤的5％。骨肉瘤起源于間葉組織，惡性程度高，侵襲性強，較早出現(xiàn)肺部轉移，因而骨肉瘤患者的預后非常差，患者生存率很低，截肢后5年存活率僅為515％?，F(xiàn)如今分子靶向治療的出現(xiàn)，給骨肉瘤患者帶來了新的福音。應激反應基因AT

3、F3是P53的一個重要靶基因，在多種癌癥中具有抑癌基因的作用，ATF3基因能調控細胞死亡，細胞周期。RITA(reactivationofp53andinductionoftumorcellapoptosis)是一種P53靶向小分子抗癌化合物，誘導P53及其靶基因表達，在許多細胞系中導致大量細胞凋亡。本課題研究了ATF3基因在抗癌化合物RITA誘導的骨肉瘤細胞(U20S)凋亡中起到的調節(jié)作用。方法：不同濃度及時間長度RITA刺激骨肉瘤細

4、胞系(U20S)，通過Westerblot及熒光定量PCR測定ATF3蛋白及mRNA表達水平。將ATF3沉默載體轉入骨肉瘤細胞系(U20S)，建立穩(wěn)定細胞系，RITA處理細胞，用MTT、流氏細胞術測定細胞凋亡水平，通過Westerblot及熒光定量PCR測定ATF3下游凋亡調控基因DR5、PUMA的蛋白及mRNA水平。結果：1、用02uMRITA處理U20S細胞后，取0，2，4，8，12，24小時收取蛋白及mRNA后，用westernb