厚殼貽貝新型抗菌肽的分子特征和重組表達.pdf

1、長久以來,國際社會對抗菌肽的研究主要集中在高等動物和一些低等昆蟲方面,海洋抗菌肽研究是近年來興起的一個熱點。作者從浙江省重要經(jīng)濟養(yǎng)殖貝類厚殼貽貝的血清中分離得到兩種抗菌活性成分,分別命名為Myticusin-1和Mytichitin。通過Edman降解,獲得了二者成熟肽N端部分序列。為了進一步了解二者的基因組成,通過在NCBI提供的數(shù)據(jù)庫中搜索同源核酸序列并以之為模板設計引物,成功克隆得到二者的成熟肽編碼序列。“兩步法”是作者結合逆轉錄

2、反應自身及逆轉錄酶固有的特點,并參閱相關文獻案例設計的一套用于克隆cDNA3’端非翻譯區(qū)(UTR)序列的方案,在本實驗中獲得了成功。本研究事先前成功構建了厚殼貽貝血細胞cDNA文庫, Myticusin-15’端非翻譯區(qū)是從文庫中克隆到的,但并沒有得到Mytichitin的5’端非翻譯區(qū)。經(jīng)過測序確認目前已經(jīng)獲得了Myticusin-1cDNA全序列,其ORF編碼生成Myticusin-1前體肽,全長128aa,前體肽由24個氨基酸長度

3、的信號肽外加104個氨基酸長度的成熟肽組成。編碼Mytichitin成熟肽共56aa,包括6個半胱氨酸。
　　運用實時熒光定量PCR進一步研究了二者的組織特異性分布以及細菌誘導后基因豐度變化情況。結果表明,前者主要表達場所為血細胞,并在誘導后36h含量達到峰值;后者主要表達場所為性腺,誘導12h后含量達到峰值。
　　通過基因工程的手段,成功將二者活性肽基因?qū)雙ET-28a(+)原核表達載體中。Mytichitin的重組表達