煙夜蛾性肽受體的分子鑒定和棉鈴蟲交配對抗菌肽表達量的影響.pdf

1、精液蛋白和抗菌肽(antimicrobial peptides，AMPs)是參與昆蟲生殖和免疫的重要生命物質。已有的研究顯示，昆蟲通過交配可以將雄蟲精液蛋白轉移至雌蟲，從而影響雌蟲的生殖行為和免疫反應。顯然，探明精液蛋白作用的分子機理，對于全面了解交配對雌蟲生殖行為轉變和免疫能力變化的調控規(guī)律，發(fā)展影響害蟲生殖過程和免疫能力的分子干擾技術等具有重要的理論及實踐意義。為此，本研究選取鈴夜蛾屬Helicoverpa近緣種昆蟲煙夜蛾H.ass

2、ulta（Guenée）和棉鈴蟲H.armigera(Hübner)為試驗材料，分別進行了煙夜蛾性肽受體(sex peptide receptor，SPR)基因的克隆與表達和7種昆蟲抗菌肽基因在不同交配狀態(tài)棉鈴蟲雌蟲腹部的表達情況研究，探討了交配對性肽受體基因和抗菌肽基因表達水平的影響規(guī)律。主要研究結果如下:
　　(1)利用RT-PCR方法，獲得了長2048 bp的煙夜蛾性肽受體基因cDNA序列，該基因開放式閱讀框為1275bp，

3、推導編碼424個氨基酸殘基，預測分子量為48.6kD，等電點為9.25。氨基酸序列分析預測該受體含有7個跨膜區(qū)，具有G蛋白偶聯(lián)受體典型的結構特征，且獲得cDNA所編碼的氨基酸與其它蛾類同源物氨基酸序列的一致性均超過80％。此基因暫被命名為HassSPR，已在GenBank中登錄，登錄號為AFH53182.1。
　　(2)利用熒光定量PCR方法，測定了HassSPR基因在煙夜蛾雌蟲不同組織、不同發(fā)育期的轉錄水平，結果表明，HassS

4、PR基因在1日齡雌蛾信息素腺體、交配囊、卵巢、腦、胸神經(jīng)節(jié)和肌肉中都有表達，其中在腦中表達量最高;該基因在羽化前1天雌蟲信息素腺體中即有表達，但表達量較低，表達量于3日齡達到最高峰，之后又逐漸降低。
　　(3)利用熒光定量PCR方法，研究了交配對煙夜蛾雌蟲不同組織（信息素腺體、交配囊、腦和卵巢）中HassSPR基因表達水平的影響。結果顯示，交配以后，雌蛾腦和信息素腺體中的HassSPR基因表達量極顯著上調，而交配囊和卵巢中Hass

5、SPR基因表達量極顯著下調。
　　(4)利用熒光定量PCR方法，研究了棉鈴蟲交配對7種抗菌肽基因表達水平的影響。結果表明，供試的7種抗菌肽基因對交配的誘導反應不盡相同，其中交配抑制天蠶素3（Cecropin3）基因的轉錄，誘導天蠶素D（CecropinD）、Moricin、防衛(wèi)素（Defensin）、蠶幼抗菌肽（Lebocin）、攻擊素(Attacin)和葛佬素（Gloverin）基因轉錄，而交配對于抗菌肽基因表達水平的影響僅局限