乏氧通過腺苷A2受體調(diào)節(jié)人成熟樹突狀細(xì)胞骨橋蛋白的表達(dá).pdf

1、研究目的:觀察乏氧對人成熟樹突細(xì)胞(mDC)分泌骨橋蛋白(OPN)的影響,探討乏氧調(diào)節(jié)人成熟樹突狀細(xì)胞(mDC)骨橋蛋白(OPN)表達(dá)的機(jī)制。
　　 方法:免疫磁珠法分離健康人外周血CD14+單核細(xì)胞,分別在常氧和乏氧條件下經(jīng)GM-CSF及IL-4培養(yǎng)7天,體外誘導(dǎo)為人成熟樹突細(xì)胞(mDC);ELISA檢測培養(yǎng)上清中骨橋蛋白(OPN)水平,RT-PCR檢測人成熟樹突細(xì)胞(mDC)中骨橋蛋白(OPN)基因水平表達(dá);流式細(xì)胞術(shù)(FA

2、CS)鑒定樹突狀細(xì)胞(DC)表型并檢測成熟樹突狀細(xì)胞(mDC)胞內(nèi)骨橋蛋白(i-OPN)表達(dá)水平;使用腺苷替代物(NECA)、特異性A2受體激動(dòng)劑(CGS21680)和特異性A2受體拮抗劑(SCH58261)探討A2受體(A2R)在調(diào)節(jié)人mDC表達(dá)OPN中發(fā)揮的作用;利用重組人TGF-β1(rhTGF-β1)及抗TGF-β1單克隆抗體(anti-TGF-β1 Ab)檢測TGF-β1在這一過程中發(fā)揮的作用;采用SPSS13.0 for w

3、indows統(tǒng)計(jì)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　 結(jié)果:
　　 ①無論乏氧環(huán)境或常氧環(huán)境下誘導(dǎo)培養(yǎng)的樹突狀細(xì)胞(DC)均可達(dá)到表型成熟;
　　 ②乏氧環(huán)境在分泌蛋白及轉(zhuǎn)錄水平顯著上調(diào)mDCs對OPN的表達(dá),乏氧組OPN的水平較正常氧條件下增加3.28倍,OPN mRNA水平也同步升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;
　　 ③常氧條件下,腺苷替代物(NECA)和A2R激動(dòng)劑均能顯著上調(diào)mDCs對OPN mRNA的表達(dá)及

4、誘導(dǎo)OPN蛋白的分泌,A2R拮抗劑可同時(shí)在分泌及轉(zhuǎn)錄水平特異性抑制A2R激動(dòng)劑對OPN的誘導(dǎo);
　　 ④乏氧環(huán)境不能調(diào)控mDC對i-OPN的表達(dá);
　　 ⑤A2R信號(hào)激活與否都不參與調(diào)控mDC對i-OPN的表達(dá);
　　 ⑥常氧條件下,A2R激動(dòng)劑促使mDCs產(chǎn)生TGF-β1增加1.36倍,A2R拮抗劑下調(diào)mDCs分泌TGF-β1,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;A2R參與調(diào)控免疫調(diào)節(jié)因子TGF-β1水平,通過rhTGF-β1和