河南漢族人群肺結核與CCL5基因多態(tài)性相關性分析.pdf

1、背景和目的
　　 肺結核(pulmonary tuberculosis,TB)是一種由結核桿菌導致的高度傳染性疾病。篩選肺結核易感基因,并確定相關基因在結核病發(fā)病中的作用,對闡明結核病的發(fā)病遺傳基礎和分子機制,從遺傳和基因角度針對性地采取預防措施,開發(fā)研制基因疫苗和治療藥物奠定基礎。近年來,隨著分子生物學的迅猛發(fā)展,尤其是人類基因組學和蛋白質(zhì)組學的發(fā)展,宿主易感基因在肺結核病發(fā)生發(fā)展中的作用越來越受到重視。
　　 趨化因

2、子是一類小分子分泌性蛋白質(zhì)。可受化學誘導物及細胞因子調(diào)節(jié),刺激炎性細胞產(chǎn)生趨化運動。其中趨化因子5(CC chemokine ligand5,CCL5)(CCL5)主要作用是誘導、激活和輔助其他細胞因子共同刺激T細胞和單核細胞,導致白細胞介素-2受體的表達,細胞因子釋放和T細胞增殖,在免疫調(diào)節(jié)和炎癥過程中起著重要作用。因此,CCL5基因在病理過程中的作用受到越來越廣泛的關注。生化代謝和免疫學等研究發(fā)現(xiàn),結核分枝桿菌感染的巨噬細胞內(nèi)趨化因

3、子5的表達水平發(fā)生改變,并與TB發(fā)生密切相關。但目前CCL5基因與肺結核相關報道極少且結論不一,國內(nèi)尚未見相關報道。
　　 本文采用聚合酶鏈反應-限制性片段長度多態(tài)性(PCR—RFLP)技術,觀察CCL5啟動子區(qū)域rs2280788:-28C／G和rs2107538:-403G／A兩個單核苷酸多態(tài)性(single nucleofide polymorphisms,SNP)位點在中國河南漢族人群中的分布情況,同時進行TB危險因素分

4、析,旨在探討CCL5啟動子區(qū)域兩個單核苷酸多態(tài)性在TB發(fā)生過程中的作用,為TB發(fā)病機制研究提供資料。
　　 方法
　　 患者組241例,納入標準均符合中華人民共和國衛(wèi)生部通告[2008]2號文件的WS288-2008肺結核診斷標準。對照組選取270例同期健康體檢的隨機個體。2組間性別、年齡匹配,均排除糖尿病、HIV感染、使用腎上腺皮質(zhì)激素及其它免疫抑制劑等。
　　 所有研究對象取外周靜脈血2ml,2％EDTA抗凝

5、,標準酚-氯仿法提取基因組DNA。采用聚合酶鏈反應一限制性片段長度多態(tài)性技術擴增目的片段并用HincⅡ和RsaⅠ酶切擴增產(chǎn)物,2.5％的瓊脂糖凝膠電泳,在紫外成像儀上檢測分析結果。
　　 以基因計數(shù)法計算TB患者與正常人群的基因型,用Hardy—Weinberg平衡及相關性檢驗評估標本群體代表性。應用SPSS17.0軟件包作統(tǒng)計學處理:x2檢驗TB病組與正常人群之間基因型和等位基因頻率差異,計算比值比(Odds Ratio,OR

6、)及95％可信區(qū)間(CI),檢驗水準α=0.05。
　　 結果
　　 1.在河南漢族人群中,CCL5基因rs2280788多態(tài)性分布在TB組與對照組相比無顯著差異(P>0.05)。
　　 2.在河南漢族人群中,CCL5基因rs2107538多態(tài)性分布在TB組與對照組相比,AA、AG、GG三種基因型和G、A等位基因頻率均具有顯著性差異(P<0.05)。
　　 3.對rs2107538位點和rs2280788

7、位點進行單體型分析,。單體型分析發(fā)現(xiàn)C-A明顯高于對照組(P<0.05),G-A低于對照組(P<0.05)。
　　 4.對rs2107538位點基因型和rs2280788位點基因型進行聯(lián)合分析,CC／AG低于對照組(P<0.05),GC／AA、GC／AA、GC／GG、CC／AA高于對照組(P<0.05)。
　　 5.CCL5基因rs2107538位點和rs2280788位點多態(tài)性的分布與西班牙相似,與中國香港存在顯著差異