丁苯酞對MPTP帕金森病模型小鼠黑質多巴胺能神經元TH、DAT、p-JNK-JNK表達的影響.pdf

1、目的：
　　 帕金森病(PD)是一種常見的與年齡相關的神經變性疾病,主要特征是黑質多巴胺能神經元的進行性丟失和變性。JNK信號轉導通路是MAPK通路的一條重要分支,它在細胞周期、生產、凋亡和細胞應激等多種生理和病理過程中起重要作用。目前研究證據(jù)表明帕金森病發(fā)生有JNK信號轉導通路的參與。丁苯酞是從我國南方的一種水芹菜籽中分離出的有效成分,簡稱NBP,又名芹菜甲素,是中國醫(yī)學科學院中國協(xié)和醫(yī)科大學藥物研究所人工合成的消旋體,從80

2、年代開始馮亦璞帶領該所開始研究NBP的藥理作用:能改善缺血區(qū)局部腦血流,增加缺血區(qū)毛細血管的數(shù)量,增加缺血區(qū)腦血流量,改善缺血性腦能量代謝,縮小梗死面積,減輕神經功能損傷程度,減輕腦水腫；還可改善線粒體功能,增強呼吸鏈功能,能改善線粒體能量泵,增加抗氧化作用,從而發(fā)揮抗凋亡；能增加大鼠全腦缺血紋狀體細胞外液氨基酸和多巴胺含量。故本試驗依據(jù)JNK在PD發(fā)病的作用來研究NBP對MPTP誘導的多巴胺能神經毒性是否具保護作用。我們選擇丁苯酞用于

3、MPTP制備C57BL/6帕金森病小鼠模型,用免疫組織化學染色方法和westernblot檢測帕金森病小鼠黑質多巴胺能神經元TH、DAT、p-JNK/JNK表達情況,觀察并分析其表達意義。
　　 方法：
　　 1、動物分組:30只C57BL/6小鼠采用完全隨機分組法分為以下3組,每組10只。(1)正常對照組(NS+植物油):腹腔注射與MPTP組等體積生理鹽水5d,再注射與治療組等體積植物油14d。(2)MPTP組(MPT

4、P+植物油):采用MPTP(30mg/kg)連續(xù)5 d腹腔注射,然后改用與治療組等體積植物油注射14 d。(3)NBP治療組(MPTP+NBP):先以MPTP(30 mg/kg)連續(xù)腹腔注射5 d,然后丁基苯酞(NBP40 mg/kg)腹腔注射14 d。每組動物于第19天處死后取腦組織進行固定石蠟包埋,取中腦黑質部位切片進行免疫組織化學染色；另外一側腦組織提取出黑質后迅速置于-80℃冰箱冷凍用于westernblot。
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5、、模型制備:MPTP(30 mg/kg)連續(xù)5 d腹腔注射,注射藥物后小鼠即刻出現(xiàn)步態(tài)跚,易激惹,毛及鼠尾豎起等反應,約5～10 min后復常態(tài),即視為模型制備成功。
　　 3、免疫組織化學染色方法檢測TH、DAT的表達。
　　 4、Westernblot方法檢測p-JNK、JNK的表達。
　　 結果：
　　 1、與正常對照組相比,MPTP組小鼠黑質多巴胺能神經元中的TH陽性神經元表達數(shù)目明顯減少(P<0

6、.05)；與MPTP組相比,NBP治療組小鼠黑質多巴胺能神經元中TH陽性神經元表達數(shù)目增加(P<0.05),二者均具有統(tǒng)計學意義。
　　 2、與正常對照組相比,MPTP組小鼠黑質紋狀體多巴胺能神經纖維中的DAT陽性神經纖維表達數(shù)目明顯減少(P<0.05)；與MPTP組相比,NBP治療組小鼠黑質紋狀體中DAT陽性神經纖維數(shù)目表達增加(P<0.05),二者均具有統(tǒng)計學意義。
　　 3、正常對照組幾乎未見p-JNK表達,MPT