MPTP慢性帕金森病小鼠模型的實驗研究.pdf

1、目的：1.觀察神經(jīng)毒素1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氫吡啶(1-methyl4-phenyl-1，2，3，6-tetrahydropyridine，MPTP)小劑量長期注射誘導的帕金森病(Parkinson’s disease，PD)小鼠模型，腦黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元數(shù)目減少和細胞凋亡情況。2.觀察神經(jīng)毒素1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氫吡啶(1-methyl-4-phenyl-1，2，3，6-tetrahydropyrid

2、ine，MPTP)小劑量長期注射誘導的慢性帕金森病(Parkinson’s disease，PD)小鼠模型，腦黑質(zhì)部α-突觸核蛋白的表達改變和異常聚集的情況。 方法：本研究采用MPTP小劑量長期注射誘導慢性帕金森病小鼠(C57BL)模型，設置實驗組和正常對照組，每組各40只小鼠，實驗組給予MPTP背部皮下注射，對照組給予生理鹽水背部皮下注射。注射完畢后于不同時間點，觀察各組小鼠是否出現(xiàn)類帕金森病癥狀，在形態(tài)學上采用HE染色觀察黑

3、質(zhì)細胞丟失情況，采用SP免疫組織化學法檢測酪氨酸羥化酶(tyrosine hydroxylase，TH)和α-突觸核蛋白的表達；采用原位末端標記法(TUNEL法)檢測黑質(zhì)多巴胺細胞凋亡現(xiàn)象。 結(jié)果：1.行為學觀察結(jié)果：與對照組比較，實驗組小鼠爬桿時間延長有明顯差異(p<0.05)，且出現(xiàn)震顫、豎毛、前腿抬高、豎尾、動作緩慢和減少等異常行為，對照組未出現(xiàn)帕金森病樣異常行為。2.形態(tài)學檢查結(jié)果：HE 染色法染色后，實驗組與對照組比較

4、黑質(zhì)區(qū)多巴胺能神經(jīng)元細胞數(shù)量減少，丟失明顯。3.SP免疫組織化學法結(jié)果：在處理完畢后第1天，第3周，第2月，第6月，實驗組小鼠中腦黑質(zhì)部TH免疫組織化學染色陽性細胞數(shù)明顯減少，陽性細胞數(shù)(CPC)較對照組均有顯著差異(p<0.05)。注射完畢后各時間段，實驗組小鼠TH表達有所變化，注射完畢后第1天TH陽性染色細胞減少最多，至第3周后逐漸開始回升，直至第6月時仍較對照組陽性染色少。4.TUNEL法結(jié)果：在處理完畢后第1天、第3周、第2月、

5、第6月，發(fā)現(xiàn)實驗組均有較多染色為棕黃色的凋亡細胞，主要集中在中腦黑質(zhì)區(qū)。而對照組偶見凋亡細胞。5、α-突觸核蛋白免疫組織化學法結(jié)果：在注射完畢后第1天、第3周、第2月、第6月，實驗組較對照組黑質(zhì)部α-突觸核蛋白陽性染色增多，陽性細胞數(shù)增多，具有顯著差異(p<0.05)。實驗組處理完畢后各階段α-突觸核蛋白陽性表達增加，并在黑質(zhì)細胞內(nèi)異常聚集。α-突觸核蛋白，在處理完畢后第1天就開始出現(xiàn)，至第3周表達最多，隨后稍有減少，但仍高于第1天，并

6、可持續(xù)表達至第6月。 結(jié)論：1、MPTP誘導C57BL小鼠出現(xiàn)類帕金森病癥狀；病理改變上出現(xiàn)中腦黑質(zhì)部多巴胺能神經(jīng)元數(shù)目減少及細胞凋亡現(xiàn)象，其發(fā)病呈慢性進行性的過程。實驗結(jié)果顯示：MPTP慢性帕金森病模型中，細胞凋亡參于了PD的發(fā)病機制。MPTP慢性帕金森病模型是更能代表臨床帕金森病自然病程的動物模型。2、慢性長期注射MPTP誘導的帕金森病小鼠模型，腦黑質(zhì)部α-突觸核蛋白持續(xù)性表達增多，并出現(xiàn)異常聚集；α-突觸核蛋白表達的時間可