斑馬魚脂肪酶家族基因的表達模式、功能與進化研究.pdf

1、脂肪是生物體重要的儲能物質,在其分解之后得到的產物—脂肪酸又是生物體重要的結構物質和活性物質,對生物體的正常生命活動起重要作用。脂肪酶是一種能夠水解甘油三酯、磷脂等脂類物質的水溶性酶類,對于生物體脂類物質的代謝以及與脂代謝相關的機體重要生理調控起重要的作用。已發(fā)現(xiàn)的脂肪酶家族成員主要包括脂蛋白脂肪酶(LPL)、肝脂肪酶(LIPC)、胰脂肪酶(PL)、內皮脂肪酶(EL)、絲氨酸磷脂酶(PLA1A)、H型脂肪酶(LH)、胰脂肪酶相關蛋白1(

2、PLRP1)和胰脂肪酶相關蛋白2(PLRP2)等。目前對脂肪酶家族成員的研究主要見于哺乳動物中,而對魚類中相關成員的存在及功能的研究還很欠缺。本文選取魚類中的模式生物斑馬魚作為研究對象,系統(tǒng)地闡明了斑馬魚脂肪酶家族基因的表達模式及其功能,并對它們的系統(tǒng)進化關系進行了分析。
　　本文首先運用半定量RT-PCR和Real-time PCR技術對斑馬魚的脂蛋白脂肪酶(LPL)、肝脂肪酶(LIPC)、內皮脂肪酶(EL)、絲氨酸磷脂酶(PL

3、A1A)和H型脂肪酶(LH)基因的組織表達進行了分析。LPL基因在斑馬魚各個組織中呈泛表達的特點,但在肝臟中的表達量遠遠大于其他組織,這與哺乳動物中的表達特征明顯不同;LIPC基因在肝組織特異表達,與哺乳動物中的表達特征完全一致;而EL、PLA1A和LH基因在各個組織中均廣泛表達?；诖?我們選取LPL和LIPC進行深入研究。在胚胎發(fā)育時期,半定量RT-PCR和Real-time PCR檢測顯示,LPL基因隨著發(fā)育的進行表達逐漸升高;胚

4、胎整體原位雜交結果顯示,在胚胎發(fā)育早期,LPL基因呈廣泛表達,隨著發(fā)育的進行,表達逐漸變化為特異表達,主要分布于腮弓、側線神經簇、胸鰭以及頭部區(qū)域。而LIPC基因在胚胎發(fā)育時期只在肝臟開始發(fā)育時才開始表達。另外,我們發(fā)現(xiàn)禁食可誘導LPL基因表達顯著升高,暗示LPL在攝食調控中發(fā)揮作用。
　　為了闡明脂肪酶基因的進化,我們又選用文昌魚為研究對象,首先進行了完善的系統(tǒng)進化分析,然后成功的對文昌魚的一個類脂肪酶基因進行了克隆;我們又對該