重癥胸部創(chuàng)傷大鼠TH1-TH2平衡的變化以及匹多莫德（Pidotimod）對(duì)其干預(yù)作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、本研究分為二部分： 第一部分：小型動(dòng)物撞擊機(jī)的研制及大鼠重癥胸部創(chuàng)傷模型的建立 目的：設(shè)計(jì)制作小型動(dòng)物撞擊裝置，并以此為基礎(chǔ)建立了大鼠重癥胸部創(chuàng)傷模型。 方法：自行設(shè)計(jì)制作小型生物撞擊裝置撞擊致傷，該裝置由一根U型截面鋼軌、動(dòng)物固定臺(tái)、驅(qū)動(dòng)彈簧、撞擊器和測(cè)速器組成。撞擊器重量可調(diào)，驅(qū)動(dòng)彈簧以不同的拉伸長(zhǎng)度牽引撞擊器沿鋼軌作直線運(yùn)動(dòng)并以不同的速度進(jìn)行撞擊；動(dòng)物固定位置可調(diào)，可以實(shí)現(xiàn)撞擊點(diǎn)的三維空間定位；動(dòng)物固定臺(tái)近

2、端設(shè)有阻攔裝置，可以通過(guò)限制撞擊器撞擊行程控制胸部撞擊時(shí)的胸壁壓縮量。在鋼軌上標(biāo)定出驅(qū)動(dòng)彈簧不同拉伸長(zhǎng)度所對(duì)應(yīng)的撞擊器的撞擊速度，反復(fù)測(cè)量15次，觀察撞擊速度的誤差以及撞擊中心點(diǎn)的圓周誤差。成年雄性SD大鼠84只，隨機(jī)平均分配為7組。均經(jīng)頸部正中切口進(jìn)行頸動(dòng)脈插管，經(jīng)耳后皮膚戳孔引出并妥善固定，頸動(dòng)脈插管連接生命體征監(jiān)護(hù)儀對(duì)大鼠平均動(dòng)脈壓、心率進(jìn)行動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)。A組為對(duì)照組，進(jìn)行假撞擊；其余各組取右腋前線第3、4肋水平作為撞擊中心點(diǎn)進(jìn)行水平

3、狀態(tài)準(zhǔn)靜態(tài)撞擊。B組設(shè)定撞擊速度3m/s，胸廓壓縮比20‰C組設(shè)定撞擊速度3m/s，胸廓壓縮比40％；D組設(shè)定撞擊速度6m/s，胸廓壓縮比20％；E組設(shè)定撞擊速度6m/s，胸廓壓縮比40％；F組設(shè)定撞擊速度9m/s，胸廓壓縮比20％；G組設(shè)定撞擊速度9m/s，胸廓壓縮比40％。大鼠撞擊前、撞擊后2小時(shí)、12小時(shí)，分別進(jìn)行動(dòng)脈血?dú)夥治?。撞擊?2小時(shí)處死所有大鼠，開(kāi)胸判斷傷情并評(píng)分后取出肺臟，行常規(guī)病理檢查。 結(jié)果：(1)該撞擊裝

4、置的撞擊速度誤差<4％，撞擊中心點(diǎn)圓周誤差小于3mm。(2)各組大鼠胸部傷情判斷評(píng)分發(fā)現(xiàn)：B、C、D、F組創(chuàng)傷較輕；E組創(chuàng)傷較重，4.08±0.90分，死亡率33.3％；G組創(chuàng)傷極重，5.25±0.62分，死亡率83.3％。(3)各組大鼠除早期死亡外，撞擊后一般表現(xiàn)為：動(dòng)脈血壓傷后即刻下降，后迅速恢復(fù)達(dá)到或超過(guò)傷前水平；心率傷后即刻下降，后迅速恢復(fù)并超過(guò)傷前水平；呼吸暫停，之后出現(xiàn)淺快呼吸。E組大鼠生命體征變化較為典型。(4)E組大鼠動(dòng)

5、脈血?dú)夥治霰憩F(xiàn)為PH降低、PaO<,2>降低、PaCO<,2>降低(p<0.05)。(5)大鼠肺損傷區(qū)域病理檢查：光鏡下肺組織結(jié)構(gòu)破壞明顯，肺泡內(nèi)的廣泛出血，傷后12小時(shí)出現(xiàn)肺泡間質(zhì)水腫，見(jiàn)炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)。 結(jié)論：(1)該動(dòng)物撞擊裝置撞擊參數(shù)控制準(zhǔn)確，重復(fù)性好，且價(jià)格低廉，適合廣泛推廣；但是同時(shí)也存在自動(dòng)化程度低，操作較為復(fù)雜等缺陷。(2)以撞擊速度6m/s、胸廓壓縮比40％為撞擊條件，建立的大鼠胸部創(chuàng)傷模型可以模擬臨床所見(jiàn)的重

6、癥胸部創(chuàng)傷患者的典型病理生理過(guò)程，穩(wěn)定可靠，可以用于胸部撞擊后胸部重癥創(chuàng)傷、肺挫傷及其繼發(fā)性損傷反應(yīng)的相關(guān)研究。 第二部分：重癥胸部創(chuàng)傷大鼠TH1/TH2平衡的變化以及匹多莫德(Pidotimod)對(duì)其干預(yù)作用的實(shí)驗(yàn)研究 目的：研究大鼠重癥胸部創(chuàng)傷后7天內(nèi)外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)體外培養(yǎng)上清液IFN-γ、IL-4水平，籍以反映體內(nèi)TH1、TH2細(xì)胞功能的變化。并初步探討了匹多莫德對(duì)重癥胸部創(chuàng)傷大鼠IFN-γ、IL-4

7、水平及TH1/TH2平衡的干預(yù)作用。 方法： SD大鼠30只，隨機(jī)平均分配到A、B、C組，A組為對(duì)照組，B組為創(chuàng)傷實(shí)驗(yàn)組，C組創(chuàng)傷+匹多莫德干預(yù)組。采用本文第一部分所述方法，頸動(dòng)脈插管后以撞擊速度6m/s、胸廓壓縮比40％條件建立大鼠重癥胸部創(chuàng)傷模型。C組大鼠傷后每日予匹多莫德100mg/kg腹腔注射，A、B組大鼠予等體積生理鹽水。分別于頸動(dòng)脈插管完成時(shí)即刻以及傷后第1、3、5、7天經(jīng)頸動(dòng)脈插管內(nèi)采取全血各0.8ml，密度梯度離

8、心法分離PBMC，加入PHA，體外培養(yǎng)72小時(shí)，收集上清液，凍存待檢。采用ELISA法檢測(cè)上清液IFN-γ、IL-4的濃度。 結(jié)果：(1)大鼠生命體征及一般情況變化，符合本文第一部分所描述的胸部重癥創(chuàng)傷后生命體征變化規(guī)律。A組死亡2例，B組死亡4例，C組死亡3例。(2)PBMC培養(yǎng)上清液IFN-γ水平比較：A、B、C三組IFN．Y濃度在傷前差異無(wú)顯著性，傷后均迅速升高，于傷后第1天即達(dá)到高峰，隨即回落，但傷后7天內(nèi)始終高于傷前水

9、平(p<0.01=；傷后7天內(nèi)的總體水平A組>C組>B組(p<0.01=。(3)PBMC培養(yǎng)上清液IL-4水平比較：A、B、C三組IL-4濃度傷前差異無(wú)顯著性，傷后均較傷前升高(p<0.01=，且7天內(nèi)保持上升趨勢(shì)；傷后7天內(nèi)的總體水平A組

10、比值，傷后均迅速升高(p<0.01=，于傷后第1天即達(dá)到高峰，隨即回落。A組傷后7天內(nèi)始終高于1.0；B傷后第3天恢復(fù)1.0左右，并繼續(xù)降低至0.34；C組傷后第7天低于1.0。傷后7天內(nèi)的總體水平A組>C組>B組(p<0.01)。 結(jié)論：(1)輕度創(chuàng)傷可以刺激大鼠的免疫功能，表現(xiàn)為IFN-γ合成的大幅增加以及IL-4合成的輕度增加，TH1細(xì)胞功能加強(qiáng)，出現(xiàn)TH1細(xì)胞功能極化。(2)重癥創(chuàng)傷大鼠在傷后早期出現(xiàn)TH1細(xì)胞功能極化，

11、TH1細(xì)胞功能增強(qiáng)，但是其幅度明顯低于對(duì)照組；創(chuàng)傷急性期后(3天后)TH2細(xì)胞功能增強(qiáng)，其幅度明顯高于對(duì)照組，TH1細(xì)胞功能受到抑制，TH1/TH2逆轉(zhuǎn)，發(fā)生TH1向TH2的漂移，出現(xiàn)TH2細(xì)胞功能極化。(3)匹多莫德提高了重癥創(chuàng)傷大鼠傷后IFN-γ的合成、釋放功能，而對(duì)IL-4沒(méi)有明顯的影響，從而延遲了TH1向TH2的漂移，并降低漂移的程度，對(duì)重癥創(chuàng)傷大鼠TH1/TH2平衡具有調(diào)節(jié)作用，但是限于本實(shí)驗(yàn)的時(shí)間長(zhǎng)度，其作用的進(jìn)一步趨勢(shì)尚不