以細胞信號傳導分子為靶點的抗腫瘤藥物篩選及作用機制初步研究.pdf

1、當前國內(nèi)外已研究的抗腫瘤藥眾多，但療效不夠高，毒副反應大。繼續(xù)尋找高效低毒、高選擇性的抗腫瘤藥物，仍是研究的熱點。分子靶向抗腫瘤藥物的研制很廣泛，但已進入臨床應用的為數(shù)不多。 ERK MAPKs信號傳導途徑在癌癥的發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用。本工作以ERK MAPKs信號傳導通路作為靶標，篩選高選擇性的抗腫瘤化合物，測定化合物抑制腫瘤細胞增殖的能力，進行作用機制研究，為創(chuàng)制出新的高活性、高選擇性抗腫瘤藥物提供實驗依據(jù)。 實

2、驗將不同濃度的化合物作用于人前列腺癌細胞PC3和小鼠成纖維細胞NIH3T3，若干時間后，分別采用Western Blot(WB，免疫印跡)、Immunoprecipitation(IP，免疫沉淀)和In Vitro(細胞體外)實驗技術(shù)，測定化合物對細胞ERK MAPKs信息傳導通路的抑制活性，確定它們作用的靶蛋白，研究其作用機制。同時采用MTT(噻唑蘭)、SRB(Sulforhodamine B，磺酰羅丹明B)方法，測定化合對腫瘤細胞的

3、增殖抑制活性。 本文的實驗結(jié)果表明，喹唑啉類化合物A001，A003，A007，A010和A011都是有效的ERK MAPKs信號傳導抑制劑。A007的效濃度為5μM，其余化合物的有效濃度均為0.5gM，5個化合物在小于10min的時間內(nèi)即可發(fā)揮抑制作用，具有較好的生物活性。Western Blot和Immunoprecipitation試驗結(jié)果表明5個化合物的作用靶標蛋白為EGFR(Epidermal Growth Facto

4、r Receptor，表皮生長因子受體)。細胞的in vitro實驗結(jié)果證實了化合物對EGFR的抑制作用是一個正向調(diào)控的過程，即直接抑制EGFR的磷酸化而不是上調(diào)去磷酸酶的去磷酸化活性的過程。 化合物GuTu01能有效抑制PDGF誘導的細胞蛋白磷酸化，其對細胞的增殖抑制可能是通過抑制細胞的PDGFR(Platelet Derived Growth Factor Receptor，血小板源生長因子受體)磷酸化，進而抑制其下游蛋白磷

5、酸化，阻斷細胞信息傳導來實現(xiàn)的。GuTu01對細胞Erk1/2磷酸化的抑制作用表現(xiàn)在10μM濃度。MTT和SRB試驗結(jié)果說明了GuTu01對人前列腺癌細胞Pc3的Ic<,50>為0.53μM，對人胃癌細胞BGC823的Ic<,50>為0.93μM，姜黃素對PC3細胞的IC<,50>為2.0μM，GuTu01優(yōu)于姜黃素。 從大黃中提取的單體化合物05071(大黃素)對EGF誘導的Erk1/2蛋白磷酸化有抑制作用，但對PDGF誘導的