鹽酸小檗堿干預(yù)TNBS誘導(dǎo)小鼠結(jié)腸炎的作用機(jī)制初探.pdf

1、炎癥性腸病(inflammatory bowel disease，IBD)包括克羅恩病(Crohn's disease，CD)和潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis，UC)，是一種胃腸道慢性非特異性炎癥性疾病。其病因未明，屬于自身免疫性疾病的一種，免疫調(diào)節(jié)紊亂是其發(fā)病的關(guān)鍵因素。三硝基苯磺酸(TNBS)誘導(dǎo)的小鼠實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎模型因發(fā)病機(jī)制和病理表現(xiàn)與人類(lèi)CD相似，故常被用于IBD治療藥物的篩選與評(píng)價(jià)。
　　鹽酸小檗堿

2、(berberine hydrochloride，BBR)又稱(chēng)黃連素，其化學(xué)結(jié)構(gòu)明確、藥理作用廣泛，能夠治療多種疾病，如高脂血癥、糖尿病、多囊卵巢綜合癥、肥胖、脂肪肝和冠心病等。另有許多研究表明 BBR還具有抗菌和誘導(dǎo)抗炎性應(yīng)答的作用，因此臨床上主要用于治療胃腸炎、細(xì)菌性痢疾等腸道感染性疾病。目前，已有一些研究發(fā)現(xiàn)BBR在TNBS誘導(dǎo)的鼠CD模型中也具有治療作用，BBR能通過(guò)抑制脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)、腸道菌叢生長(zhǎng)及NF-κB的激活來(lái)緩解TNB

3、S小鼠結(jié)腸炎，但是BBR在 IBD中對(duì)固有免疫應(yīng)答細(xì)胞和適應(yīng)性免疫應(yīng)答細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用還沒(méi)有系統(tǒng)的研究。因此，我們以TNBS誘導(dǎo)的小鼠CD腸炎模型為基礎(chǔ)，進(jìn)一步探討其在IBD治療中的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制，為臨床治療IBD提供理論依據(jù)。
　　我們首先建立TNBS誘導(dǎo)的小鼠CD模型，觀察BBR治療對(duì)CD小鼠體重變化、局部結(jié)腸宏觀變化和病理變化的治療效果，并進(jìn)一步通過(guò)ELISA、FACS和Real-time PCR方法檢測(cè)了體內(nèi)給予BBR治療5天

4、后，小鼠局部和外周T細(xì)胞亞群及巨噬細(xì)胞(macrophage，Mφ)亞群數(shù)量變化和相關(guān)的細(xì)胞因子和轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)變化。另外，在體外誘導(dǎo)分化條件下，我們檢測(cè)了BBR對(duì)Th1、Th17和Treg細(xì)胞亞群分化比例的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：1.與TNBS組相比，體內(nèi)給予BBR能緩解小鼠發(fā)病的臨床癥狀，體重恢復(fù)時(shí)間提前、速度加快，結(jié)腸大體損傷及病理評(píng)分下降。2. BBR治療后，結(jié)腸勻漿上清炎癥因子 IFN-γ、IL-17、IL-6、IL-1β和TNF

5、-α的水平顯著下降，抗炎性因子IL-10則升高，免疫組化、流式和PCR結(jié)果證明結(jié)腸局部炎癥細(xì)胞Th1、Th17、Mφ浸潤(rùn)減少，負(fù)調(diào)性Treg細(xì)胞比例同樣降低。3. BBR治療后，外周脾臟中Th1、Th17和Treg亞群的比例及相關(guān)的細(xì)胞因子水平均有下降，相應(yīng)的轉(zhuǎn)錄因子T-bet、RORγt、Foxp3也有不同水平的降低；BBR治療可通過(guò)上調(diào)M2/M1的比例而發(fā)揮抗炎作用。4.同時(shí)我們?cè)隗w外實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)BBR能抑制T細(xì)胞亞群Th1和Th17