復合克林霉素的磷酸鈣水泥預防內(nèi)植物感染的實驗研究.pdf

1、目的 本課題旨在探討磷酸鈣水泥(calciumphosphatecement，CPC)作為克林霉素載體的可行性；不同材料內(nèi)植物對表皮葡萄球菌形成生物被膜的影響；探討復合克林霉素的磷酸鈣水泥(clindamycin-loadedcalciumphosphatecement，CLCPC)預防兔膝關(guān)節(jié)內(nèi)植物感染的可能性及體內(nèi)CLCPC釋放的克林霉素對其骨再生有無影響。 方法 CPC作為克林霉素載體的可行性研究：根據(jù)AS

2、TMC266-89方法測定0％、2％、5％CLCPC的固化時間。HPLC測定2％、5％CLCPC試樣浸于PBS液中克林霉素的釋放濃度和動態(tài)觀察釋放持續(xù)時間。采用平皿擴散法觀察2％、5％CLCPC及2％CLPMMA體外抑菌能力。XRD及SEM觀察分析0％、2％、5％CLCPC的固化產(chǎn)物及其晶體大小。 不同材料內(nèi)植物影響生物被膜形成的體外研究：表皮葡萄球菌及其形成生物被膜能力鑒定。體外將不同材料內(nèi)植物試樣與表皮葡萄球菌共同培養(yǎng)，通過

3、SEM觀察不同材料試樣表面生物被膜形成情況。并將不同材料試樣表面粘附細菌經(jīng)胰酶消化定量接種培養(yǎng)進行菌落計數(shù)，確定表皮葡萄球菌容易在何種材料試樣表面粘附及形成生物被膜。 CLCPC預防內(nèi)植物感染的實驗研究：新西蘭大白兔15只，隨機分為對照組，肌注組及CLCPC組。兔膝關(guān)節(jié)內(nèi)植物術(shù)后接種1ml×0.5Mc表皮葡萄球菌，對照組不給予處理，肌注組及CLCPC組分別肌注克林霉素和局部使用CLCPC預防感染。術(shù)后每天觀察傷口情況，測量體溫、

4、體重，行WBC檢查。SEM及LCSM觀察UHMWPE墊圈表面生物被膜形成情況。 CLCPC體內(nèi)形成新骨的觀察：本實驗共用前一研究兔子模型，觀察股骨髁骨缺損處CLCPC新骨形成；骨組織不脫鈣切片及X線片檢查觀察CLCPC降解和成骨情況；SEM觀察CLCPC與骨組織交界處整合情況。 結(jié)果 CPC作為克林霉素載體的可行性研究：克林霉素縮短了CLCPC的固化時間。CLCPC釋放克林霉素在最初6小時呈暴發(fā)性，到第4天克林霉

5、素釋放速度逐漸減慢，觀察至42天時仍能維持釋放。每日2％CLPMMA抑菌環(huán)比2％CLCPC抑菌環(huán)小，而2％CLCPC比5％％CLCPC的抑菌環(huán)小，CLCPC至抑菌試驗42天時仍然具有抑菌作用。X射線晶體衍射及掃描電鏡觀察克林霉素對CLCPC固化產(chǎn)物及晶體大小無影響。 不同材料內(nèi)植物影響生物被膜形成的體外研究：菌株經(jīng)鑒定為表皮葡萄球菌及可形成生物被膜。SEM觀察發(fā)現(xiàn)UHMWPE材料表面有較多生物被膜形成，鈦合金表面部分細菌聚集成團

6、，國產(chǎn)PMMA表面粘附許多單個細菌菌落，CPC表面可見單個細菌。細菌計數(shù)結(jié)果為骨水泥表面比CPC表面有更多細菌粘附，PMMA表面最多，鈦合金表面最少。 CLCPC預防內(nèi)植物感染的實驗研究：對照組3只兔子形成竇道、1只兔子形成膿腫，肌注組及CLCPC組各有2只兔子形成竇道；對照組及肌注組竇道有大量分泌物，CLCPC組無分泌物。術(shù)后CLCPC組兔子平均體溫介于對照組及肌注組之間。CLCPC組兔子平均體重有緩慢增加趨勢，而肌注組呈下降

7、趨勢。術(shù)后CLCPC組WBC升高程度比肌注組及對照組輕。SEM及LCSM觀察各組UHMWPE墊圈表面均形成生物被膜。 CLCPC體內(nèi)形成新骨的觀察：大體標本可見股骨髁骨缺損處CLCPC形成新骨；骨組織不脫鈣切片及X線片檢查可見CLCPC正在降解和形成新骨；電鏡觀察CLCPC已與骨組織整合在一起。 結(jié)論 CPC可作為克林霉素的載體材料。表皮葡萄球菌在不同材料內(nèi)植物表面粘附及形成生物被膜有明顯區(qū)別，表皮葡萄球菌容易在