白介素13和溶血磷脂酸對人肝星狀細胞合成Ⅰ型和Ⅲ型膠原的影響.pdf

1、目的:
　　 白細胞介素13(Interleukine-13,IL-13)是一種主要由激活的T淋巴細胞(Th2細胞)產生的具有多效能的免疫調節(jié)細胞因子。它可以調節(jié)炎癥、黏液的產生、組織重建和纖維化。IL-13在肝纖維化、腎纖維化、心臟纖維化、肺纖維化等纖維化疾病發(fā)病機制中起重要的作用,它通過與IL-13受體α1(IL-13Ra1)結合產生促纖維化作用,因此它是纖維化疾病治療的重要靶點。
　　 溶血磷脂酸(Lysophos

2、phatidic acid,LPA)是一種細胞膜脂類衍生物,是已知最小、最簡單的甘油磷脂分子。LPA由成纖維細胞、血小板、脂肪細胞、癌細胞等分泌,是一種重要的細胞絲裂原素,它的作用多樣化。它具有促進血管平滑肌收縮、促進血小板聚集等作用,也可以抑制細胞的增殖和膠原的合成。
　　 本實驗主要檢測IL-13是否能促進人肝星狀細胞膠原的合成,溶血磷脂酸(LPA)是否能下調人肝星狀細胞膠原的合成,為臨床上肝硬化等纖維化疾病提供治療的理論基

3、礎和實驗依據。
　　 方法:
　　 1.臺盼藍染色檢測肝人星狀細胞LX-2的活性。
　　 2.HE染色觀察LX-2細胞的形態(tài)。
　　 3.檢測LPA刺激LX-2細胞對IL-13Rα1表達的影響。分別以不同濃度、不同時間刺激LX-2細胞,并設空白對照組,RT-PCR檢測IL-13Rα1mRNA的表達。
　　 4.檢測IL-13刺激LX-2細胞對Ⅰ型膠原(Procollagen typeⅠ,PCOLⅠ

4、)、Ⅲ型膠原(Procollagen typeⅢ,PCOLⅢ)mRNA表達的影響;檢測LPA刺激LX-2細胞對Ⅰ型膠原(PCOLⅠ)、Ⅲ型膠原(PCOLⅢ)mRNA表達的影響,用不同濃度LPA在不同時間刺激LX-2細胞,RT-PCR檢測PCOLⅠ、PCOLⅢmRNA的表達;然后分四組:空白組、IL-13組、LPA和IL-13混合組、LPA組,RT-PCR檢測PCOLⅠ、PCOLⅢ mRNA的表達。
　　 5.免疫組化檢測Ⅰ型膠原

5、蛋白的表達。分四組:空白組、IL-13組、LPA和IL-13混合組以及LPA組。
　　 結果:
　　 1.LX-2細胞活性良好,而且IL-13和LPA對細胞無毒性作用。
　　 2.HE染色觀察LX-2細胞為星狀,細胞核呈圓形或橢圓形。
　　 3.RT-PCR檢測顯示,不同濃度LPA在不同時間刺激LX-2細胞,對LX-2細胞表達IL-13Rα1mRNA無影響。
　　 4.RT-PCR檢測顯示,IL-

6、13刺激LX-2細胞后,PCOLⅠ、PCOLⅢmRNA表達上調。
　　 5.0.1μM濃度的LPA刺激LX-2細胞6h、12h、24h時,LX-2細胞PCOLⅠ、PCOLⅢmRNA表達與空白對照組相比無明顯變化。1μM、10μM LPA刺激24h后,LX-2細胞PCOLⅠ、PCOLⅢmRNA表達下降。分組實驗結果顯示:IL-13組PCOLⅠ、PCOLⅢmRNA的表達均高于空白對照組,而LPA組的表達均低于空白對照組。免疫組化檢測