正常孕期蛻膜NK樣細胞特征性分化抗原及殺傷功能變化的動態(tài)研究.pdf

1、目的:在妊娠過程中,胎兒作為半同種異體移植物,未被母體排斥,與母胎界面建立的微妙免疫平衡有關,孕期蛻膜免疫微環(huán)境的變化尤為關鍵。其中蛻膜組織中NK樣大顆粒淋巴細胞的孕期變化是保證正常妊娠進程的中心環(huán)節(jié),有關正常妊娠過程中,母體蛻膜NK樣細胞功能變化與其特征性分化抗原及殺傷功能變化之間關系的機制研究尚需進一步深入。
　　 本實驗采用流式細胞技術分析蛻膜NK樣細胞在整個妊娠過程中其數量及其特征性分化抗原CD、表面受體NKG2A(抑制

2、性受體)、NKG2D(活化性受體)及胞內殺傷活性物質穿孔素的動態(tài)表達。旨在了解母體受孕后蛻膜NK樣細胞CD表型轉換的發(fā)生機制及與子宮內膜局部免疫微環(huán)境之間的關系,為揭示妊娠免疫耐受及病理妊娠發(fā)病機理奠定實驗基礎和提供理論依據。
　　 方法:
　　 1隨機取要求人工流產的正常孕早期婦女20例作為孕早期組。隨機取孕13～27周內要求水囊引產或瘢痕子宮行剖宮取胎術的患者20例作為孕中期組,隨機取足月剖宮產患者20例作為孕晚期組

3、。隨機取正常未孕婦女,均為男方精液異常的不孕患者20例作為未孕對照組。各組婦女均無臨床合并癥及妊娠并發(fā)癥。
　　 2臨床無菌取材,機械分離細胞法制備內膜及蛻膜非貼壁單核細胞懸液后,用直接熒光標記流式細胞技術分別檢測CD3-CD56+NK樣細胞,CD16+CD56+殺傷性NK樣細胞及CD16-CD56+非殺傷NK樣細胞、CD56+NKG2D+NK樣細胞表面活化性受體及CD56+NKG2A+抑制性受體、CD56+perforin+N

4、K樣細胞胞內活化標志在正常妊娠各組間的動態(tài)表達。
　　 3應用SPSS13.0軟件包進行統(tǒng)計學處理,對各組檢測指標數據進行方差齊性檢驗后,以One-Way ANOVA方差分析各組內膜及蛻膜組織NK樣細胞的數量和表面分化抗原簇的表達是否存在差異,以及各組NK細胞表面受體NKG2D(活化性受體)和NKG2A(抑制性受體)的表達及其胞內活化標志物穿孔素的表達是否存在差異。
　　 結果:
　　 1正常孕期蛻膜組織中NK樣

5、細胞特征性分化抗原的表達
　　 1.1 CD3-CD56+NK樣細胞的表達
　　 與未孕對照組內膜組織中CD3-CD56+NK樣細胞百分率(18.08％±4.76％)相比,早孕組、中孕組蛻膜組織中的百分率呈遞進性顯著增高(分別為38.94％±4.82％,P＜0.01;75.55％±6.25％,P＜0.01),晚孕組蛻膜組織中的百分率(4.06％±1.26％,P＜0.01)顯著降低。妊娠各組間均有顯著差異(P＜0.01)。

6、
　　 1.2 CD16+CD56+NK樣細胞的表達
　　 與未孕對照組內膜組織中CD16+CD56+NK樣細胞百分率(5.72％±2.11％)相比,早孕組、中孕組蛻膜組織中的百分率無顯著變化(分別為5.02％±1.81％,6.03％±1.25％,均P＞0.05),晚孕組蛻膜組織中NK樣細胞的百分率顯著降低(1.40％±0.36％,P＜0.01);與未孕對照組內膜組織中NK樣細胞CD16+CD56+/CD3-CD56+比

7、率(31.31％±5.63％)相比,早孕組、中孕組蛻膜組織中的比率呈遞進性顯著降低(分別為12.75％±3.76％,8.01％±1.89％,均P＜0.01),晚孕組蛻膜組織中的比率回升至未孕對照組水平(33.05％±4.63％,P＞0.05)。
　　 1.3 CD16-CD56+NK樣細胞的表達
　　 與未孕對照組內膜組織中CD16-CD56+NK樣細胞百分率(12.36％±2.99％)相比,早孕組、中孕組蛻膜組織中的百

8、分率呈遞進性顯著增高(分別為33.38％±2.80％,P＜0.01;69.52％±6.58％,P＜0.01),晚孕組蛻膜組織中NK樣細胞的百分率(2.91％±0.94％,P＜0.01)顯著降低;與未孕對照組內膜組織中NK樣細胞CD16-CD56+/CD3-CD56+比率(68.69％±5.63％)相比,早孕組、中孕組蛻膜組織中的比率呈遞進性顯著增高(分別為87.22％±3.73％,P＜0.01;91.94％±1.89％,P＜0.01),

9、晚孕組蛻膜組織中的比率下降恢復至未孕對照組水平(66.46％±4.42％,P＞0.05)。
　　 2.蛻膜組織中NK樣細胞表面抑制性受體及活化性受體的表達與未孕對照組內膜組織中CD56+NKG2D+NK樣細胞百分率(5.53％±0.82％)相比,早孕組、中孕組蛻膜組織中的百分率呈遞進性顯著增高(分別為12.05％±4.34％,P＜0.01;21.46％±0.67％,P＜0.01),晚孕組蛻膜組織中的百分率(1.20％±0.36％

10、,P＜0.01)顯著降低;與未孕內膜對照組內膜組織中NK樣細胞CD56+NKG2D+/CD3-CD56+比率(31.33％±5.82％)相比,早孕組、中孕組、晚孕組蛻膜組織中的比率(分別為30.78％±9.05％,28.53％±1.75％,27.90％±4.00％,均P＞0.05)無顯著變化。
　　 與未孕對照組內膜組織中CD56+NKG2A+NK樣細胞百分率(3.76％±0.79％)相比,早孕組、中孕組蛻膜組織中的百分率呈遞進

11、性顯著增高(分別為8.53％±3.08％,P＜0.01;13.55％±0.78％,P＜0.01),晚孕組蛻膜組織中NK樣細胞的百分率(1.14％±0.36％,P＜0.01)顯著降低;與未孕對照組內膜組織中NK樣細胞CD56+NKG2A+/CD3-CD56+比率(21.54％±4.83％)相比,早孕組蛻膜組織中的比率(21.67％±6.34％,P＞0.05)無顯著變化,中孕組比率(18.03％±0.82％,P＜0.01)顯著降低,晚孕組(

12、26.38％±4.04％,P＜0.01)顯著增高。
　　 與未孕對照組內膜組織中NK樣細胞CD56+NKG2A+/CD56+NKG2D+比值(0.67:1±0.09)相比,早孕組蛻膜組織中的比值(0.70:1±0.04,p＞0.05)無顯著變化,中孕組比值(0.62:1±0.20,P＜0.01)顯著降低,晚孕組(0.94:1±0.23,P＜0.01)顯著增高。
　　 3.蛻膜組織中NK樣細胞殺傷功能的檢測
　　

13、與未孕對照組內膜組織中NK樣細胞CD56+perforin+百分率(4.36％±0.71％)相比,早孕組、中孕組蛻膜組織中的百分率呈遞進性顯著降低(分別為2.89％±0.49％,P＜0.01;3.01％±0.72％,P＜0.01),晚孕組百分率有所回升(3.54％±0.91％)但仍低于未孕對照組(P＜0.01);與未孕對照組內膜組織中NK樣細胞CD56+perforin+/CD3-CD56+比率(24.98％±4.29％)相比,早孕組、

14、中孕組蛻膜組織中的比率(分別為7.42％±0.54％,3.96％±0.70％,均P＜0.01)呈遞進性顯著降低,晚孕組(85.09％±7.05％,P＜0.01)顯著升高。
　　 結論:
　　 1.妊娠子宮蛻膜組織中NK樣細胞數量從孕早期開始逐漸升高至孕中期達高峰,隨后逐漸降低,同時伴隨著胞內穿孔素表達的相應動態(tài)變化。
　　 2.NK樣細胞CD表型的變化,早期以CD16-CD56+占優(yōu)勢,至孕晚期NK樣細胞向CD1