以PMI基因為選擇標記雪柑轉基因體系的建立.pdf

1、柑桔是世界上最重要的水果之一，在我國水果產(chǎn)業(yè)中占據(jù)了重要的經(jīng)濟地位。但是因為柑桔上存在童期過長、多胚性現(xiàn)象、遺傳的高度雜合及單性結實等特點，利用常規(guī)育種方法受到限制，影響了育種工作的進行。近年來，不斷完善的轉基因技術為我們提供了一種更加快速直接的育種和品種改良手段。 轉基因技術日益成為品種改良的重要手段，并為人類帶來巨大收益，但是由于目前大多使用抗生素抗性基因和抗除草劑類基因作為標記基因，對環(huán)境和人類健康存在或潛藏著無法評估的不

2、良影響和損害，從而限制了轉基因作物在商業(yè)生產(chǎn)中的推廣利用。目前解決這一問題最有效的方法就是利用無爭議的生物安全標記基因。 本研究以福建省優(yōu)良柑桔品種雪柑(Citrus sinensis Osb．‘Xuegan’)實生苗上胚軸為外植體，建立了高效的再生體系。構建了6-磷酸甘露糖異構酶(PMI)基因為選擇標記的植物表達載體，并通過根癌農(nóng)桿菌介導的方法，建立了雪柑生物安全標記PMI基因為選擇標記的轉化系統(tǒng)，為雪柑的品種改良奠定基礎。主

3、要結果如下： 1) 以雪柑實生苗上胚軸為材料，建立了高效離體培養(yǎng)再生體系。上胚軸縱切結合前期暗培養(yǎng)，在MS附加BA 3mg/L、蔗糖30g/L培養(yǎng)基中，不定芽誘導率為100％，每個外植體平均誘導的不定芽數(shù)達33.8；不定芽在1000mg/LIBA溶液中浸泡10 min后，移入1/4 MT(大量元素)+1/2 MT(其它元素)+10g/L蔗糖的液體培養(yǎng)基中，采用濾紙橋法進行培養(yǎng)，生根率達100％，平均根數(shù)2.5條；移苗成活率達10

4、0％。 2)構建了三個PMI基因為選擇標記的植物表達載體：Ⅰ：pBIPMI，將PMI基因(manA)代替表達載體pBl121上的GuS基因；Ⅱ：pCl301PMI，用PMI基因(manA)取代pC1301上的選擇標記基因htp；Ⅲ：pCl301PMI-LFY，將擬南芥花分生組織特性基因LFY構建到以PMI基因(manA)為選擇標記基因的表達載體pC1301PMI上。 3)以PMI基因為選擇標記雪柑轉化體系的建立。經(jīng)過在含