上調(diào)miR-143對宮頸癌HeLa細胞增殖的影響.pdf

1、背景與目的:
　　宮頸癌的發(fā)病率占婦科惡性腫瘤的第一位。宮頸癌的病因尚未完全闡明，已經(jīng)明確的是與致癌性的人乳頭瘤病毒(Humanpapillomavirus，HPV)感染密切相關(guān)。但并不是所有感染HPV者都會發(fā)生癌變。宮頸癌的發(fā)生和發(fā)展是一個極其復雜的過程，涉及多種與細胞的生物學過程有關(guān)的基因結(jié)構(gòu)與表達的異常。人們在研究宮頸癌的發(fā)生發(fā)展機制時，發(fā)現(xiàn)微小RNA(microRNA)分子表達失調(diào)與腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)。
　　micr

2、oRNA(簡稱miRNA或miR)是一類長度約20～25個核苷酸，進化保守的，具有調(diào)控功能的單鏈非編碼RNA分子。成熟的miRNA參與細胞的增殖、分化、發(fā)育和凋亡過程。這些小分子RNA的作用類似于癌基因或抑癌基因。例如，miR-15a/16-1在慢性淋巴細胞白血病中群集缺失或下調(diào);miRNAlet-7在肺癌和乳腺癌中下調(diào);miR-17在肺癌中表達水平上調(diào)。Wang等發(fā)現(xiàn)，miR-126、miR-143、miR-154在宮頸癌中表達水平下

3、降，而miR-15b、miR-16、miR-146a、miR-155在宮頸癌中的表達水平升高。miRNA-143在結(jié)直腸癌中表達異常，上調(diào)結(jié)腸癌細胞miR-143的表達水平，能夠抑制腫瘤細胞增殖，促進凋亡。miR-143在宮頸癌中的研究不多，我們之前的研究顯示miR-143在宮頸癌組織中呈低表達水平，其表達水平與組織病理分級和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)。本研究采用細胞培養(yǎng)的方法，將miRNA-143轉(zhuǎn)染進宮頸癌HeLa細胞，運用熒光定量PCR技術(shù)檢

4、測轉(zhuǎn)染前后miR-143在宮頸癌HeLa細胞中的表達水平，MTT的方法分析細胞體外增殖情況。我們旨在探索miRNA-143的過表達是否對宮頸癌HeLa細胞的增殖產(chǎn)生影響，研究miR-143在宮頸癌發(fā)病機制中的作用。我們的研究為這些miRNA在宮頸癌的基因診斷及分子生物學治療方面的臨床應用提供理論依據(jù)。
　　材料與方法:
　　1.實驗分組
　　設(shè)置兩個實驗組，依據(jù)預實驗情況轉(zhuǎn)染兩個濃度的miR-143mimics。實驗A

5、組轉(zhuǎn)染miR-143mimics終濃度為10nmol/L(nM);實驗B組轉(zhuǎn)染miR-143mimics的終濃度為20nmol/L（nM）。共設(shè)置三個對照組，轉(zhuǎn)染試劑組對照組加入轉(zhuǎn)染試劑、培養(yǎng)基、和HeLa細胞;空白對照組只含有培養(yǎng)基和HeLa細胞;陰性對照組轉(zhuǎn)人工合成的miR-143陰性對照10nmol/L(nM)。
　　2.實驗方法
　　選取宮頸腺癌HeLa細胞系，按以上分組情況采用瞬時轉(zhuǎn)染的方法將人工合成的miR-14

6、3模擬體(miR-143mimics)轉(zhuǎn)染進宮頸癌HeLa細胞，體外上調(diào)HeLa細胞中miR-143的表達水平。用熒光定量PCR技術(shù)檢測轉(zhuǎn)染后各組細胞中miR-143的表達情況;四甲基偶氮唑藍(MTT)法檢測轉(zhuǎn)染后各組細胞的增殖活性，探討miR-143對宮頸癌HeLa細胞增影殖的響。采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件包經(jīng)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計，數(shù)值變量資料以(x)±s表示，兩組間均數(shù)比較采用t檢驗，多組樣本細胞增殖率比較采用重復測量資料的方差分析，兩組間

7、差異比較采用LSD法。檢驗水準α=0.05，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)果:
　　1.轉(zhuǎn)染后與空白對照組相比，實驗A組(轉(zhuǎn)染10nMmiR-143mimics)與實驗B組(轉(zhuǎn)染20nMmiR-143mimics)miR-143相對表達量分別為7.38和13.71，各組間差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);與轉(zhuǎn)染試劑對照組相比，實驗A組與實驗B組miR-143的相對表達量分別為4.23和7.86，各組間差異具有統(tǒng)計

8、學意義(P＜0.05)。實驗B組與實驗A組相比，實驗B組miR-143相對表達量明顯增高，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　2.與三對照組相比，實驗A組（轉(zhuǎn)染10nMmiR-143mimics）與實驗B組（轉(zhuǎn)染20nMmiR-143mimics）HeLa細胞的增值率下降，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);細胞增殖率從轉(zhuǎn)染后24h開始下降，48h后HeLa細胞增殖率明顯下降。實驗B組與實驗A組相比，實驗B組HeLa細胞增殖率

9、下降更明顯，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論:
　　1.miR-143mimics轉(zhuǎn)染宮頸癌HeLa細胞能夠有效的提高miR-143在宮頸癌HeLa細胞中的表達水平。實驗A組與實驗B組轉(zhuǎn)染miR-143mimics后，HeLa細胞中miR-143的表達水平隨著轉(zhuǎn)染濃度的增加而上升。
　　2.上調(diào)miR-143在宮頸癌HeLa細胞中的表達水平后，HeLa細胞增殖明顯受到抑制，且受抑制程度與轉(zhuǎn)染濃度呈劑量效應