從自噬調(diào)控探討清熱活血方及芹菜素對肺腺癌細胞A549的作用機制.pdf

1、在世界范圍內(nèi)，每年因肺癌死亡者約占因癌癥死亡總?cè)藬?shù)的28％，居于因癌癥死亡原因的首位。我國的肺癌發(fā)病率以每年11％速度遞增。肺癌由于其生物學(xué)特性復(fù)雜，及現(xiàn)代醫(yī)學(xué)治療手段的局限性，腫瘤的綜合治療模式已成為現(xiàn)在及未來肺癌臨床干預(yù)的必然趨勢。近年來，中醫(yī)藥及其提取物在肺癌綜合治療中的作用引起越來越廣泛的關(guān)注。本研究在中醫(yī)溫病學(xué)理論指導(dǎo)下，以清熱活血法為主要治法，選用臨床驗方加味葦莖湯及有效抗腫瘤成分芹菜素進行了系統(tǒng)、深入地文獻研究、理論研究和

2、實驗研究。
　　第一部分:文獻研究。從病名、病因病機、治則治法方面闡述了古代中醫(yī)學(xué)對肺癌的認識，進而對中醫(yī)藥治療肺癌的現(xiàn)狀進行了分析，總結(jié)強調(diào):中醫(yī)藥對肺癌的治療作用，是通過改善患者整體狀況、抑制肺癌瘤體生長及轉(zhuǎn)移、并發(fā)癥調(diào)治、協(xié)同西醫(yī)治療等多方面治療而發(fā)揮的綜合作用。
　　第二部分:理論研究。首先，對肺癌初期熱瘀互結(jié)證型及清熱活血法進行了探析。認為肺癌初期正氣受損尚輕，邪熱實積較盛，最終導(dǎo)致瘀熱痰互結(jié)而形成腫物，故應(yīng)施予清

3、熱活血法為主進行治療。其次，對選方用藥進行了理論與實踐依據(jù)的論述，著重闡述了以下三點:其一，加味葦莖湯治療肺癌的臨床應(yīng)用及實驗研究成果;其二，芹菜素可通過多種途徑發(fā)揮抗腫瘤作用;其三，自噬在肺癌發(fā)生發(fā)展及治療過程中具有重要意義。
　　第三部分:實驗研究。運用現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)，從細胞自噬調(diào)控的角度，探討以清熱活血為主要功效的加味葦莖湯及其成分芹菜素對肺腺癌A549細胞的影響。研究結(jié)果表明，該方法在抑制腫瘤細胞生長、細胞周期阻滯、細

4、胞凋亡和自噬相關(guān)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等方面均有良好作用。
　　第一，生長抑制:MTT結(jié)果顯示，加味葦莖湯含藥血清及芹菜素均能抑制A549細胞生長增殖，并呈現(xiàn)一定的量效、時效關(guān)系。
　　第二，促進凋亡:通過藥物作用，熒光顯微鏡下可見凋亡小體出現(xiàn)，表明兩藥均能誘導(dǎo)肺癌A549細胞的凋亡，提示加味葦莖湯含藥血清及芹菜素均可通過誘導(dǎo)細胞凋亡途徑抑制肺癌A549細胞的增殖而發(fā)揮治療作用。芹菜素作用A549細胞后，脫落細胞數(shù)、凋亡小體明顯多于含藥血

5、清組，且根據(jù)流式細胞儀檢測細胞凋亡率，芹菜素組誘導(dǎo)細胞凋亡作用明顯優(yōu)于含藥血清組(P＜0.01)，進一步證明了芹菜素可促使肺癌A549細胞凋亡明顯增加，與增殖抑制實驗數(shù)據(jù)相符，提示芹菜素主要是通過誘導(dǎo)凋亡方式抑制A549細胞的生長。
　　第三，周期阻滯:兩藥對A549細胞周期均產(chǎn)生了影響，與空白對照組比較，周期分布有了明顯變化（P＜0.05）。但兩藥對A549細胞生長相關(guān)指標的具體影響差異明顯:藥物作用相同時間后，芹菜素50μmo

6、l/L組（最高濃度）對細胞的抑制作用明顯高于10％含藥血清組（最高濃度）(P＜0.01)，說明在本實驗濃度梯度設(shè)置范圍內(nèi)，芹菜素對A549細胞的增殖抑制作用優(yōu)于加味葦莖湯含藥血清;在周期阻滯方面，加味葦莖湯含藥血清主要通過將A549細胞阻滯于G2期，阻止細胞進行有絲分裂來發(fā)揮抗腫瘤作用;芹菜素對細胞也有G2期阻滯作用，但未呈現(xiàn)量效時效關(guān)系。
　　第四，信號通路抑制:加味葦莖湯含藥血清、芹菜素均能夠抑制A549細胞內(nèi)mTOR、PI-