昆蟲(chóng)病原線(xiàn)蟲(chóng)共生細(xì)菌5-5B菌株的鑒定及發(fā)酵條件研究.pdf

1、本文采用表觀分類(lèi)的方法對(duì)本實(shí)驗(yàn)室2003年自斯氏線(xiàn)蟲(chóng)體內(nèi)分離出的一株共生菌高毒力菌株5-5B進(jìn)行了形態(tài)觀察及生理生化特征的測(cè)定。結(jié)果表明：5-5B菌株的形態(tài)特征和生理生化特點(diǎn)與致病桿菌屬中已知五種中的嗜線(xiàn)蟲(chóng)致病桿菌(Xenorhabdus nematophilus)的特征較為一致，據(jù)此根據(jù)表型特征的分類(lèi)方法可以判斷該菌株為致病桿菌屬(Xenorhabdus nematophilus)嗜線(xiàn)蟲(chóng)致病桿菌種下一個(gè)株系。 研究了昆蟲(chóng)病原線(xiàn)

2、蟲(chóng)共生菌5-5B菌株的發(fā)酵條件，結(jié)果表明：5-5B菌株的最適生長(zhǎng)溫度為28℃，最適起始pH值為7.3～7.8，最佳振蕩頻率為160r/min，裝液量為40 ml/250ml，接菌量為4％。5-5B菌株發(fā)酵液對(duì)小菜蛾初孵幼蟲(chóng)的殺蟲(chóng)活性研究表明，裝液量為40ml/250ml時(shí)，校正死亡率為62.78％；接菌量為4％時(shí)，校正死亡率為63.84％；起始pH為7.3時(shí)，校正死亡率為65.49％。 測(cè)定了發(fā)酵液中糖、蛋白質(zhì)，氨基氮含量變化，

3、DO值的總體變化規(guī)律為急劇下降到零，4h后開(kāi)始逐漸上升，最后穩(wěn)定在121；總糖和還原糖的含量具逐漸降低的趨勢(shì)，在28h后分別穩(wěn)定在0.41mg/ml，0.58mg/ml左右；利用考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定蛋白質(zhì)含量的變化，0～8h之間，蛋白質(zhì)的含量緩慢下降的，從第8h始，至第24h之間急劇下降，24h后回升，40h后蛋白質(zhì)含量穩(wěn)定在0.18左右；氨基氮的變化規(guī)律為隨著時(shí)間的延續(xù)，氨基氮的含量總體趨勢(shì)是逐漸增加的，在第52h時(shí)達(dá)到最高為0.38mg

4、/ml。 篩選發(fā)酵所需碳源、氮源和無(wú)機(jī)鹽，最佳碳源為2％的葡萄糖，產(chǎn)菌量最大為1.8×10<'-9>個(gè)/ml；最佳氮源為0.5％牛肉膏，產(chǎn)菌量最大為2.32×10<'9>個(gè)/ml；最佳無(wú)機(jī)鹽為0.2％磷酸氫二鉀(K<,2>HPO<,4>)，產(chǎn)菌量最大為1.29x10<'9>個(gè)/ml。 采用5-5B菌株對(duì)15種植物病原真菌的菌絲抑菌進(jìn)行了試驗(yàn)，結(jié)果表明，對(duì)其中的5種效果相對(duì)較好。病原真菌培養(yǎng)到第5d，分別稀釋2倍，5倍，1

5、0倍，20倍，40倍，60倍濃度后，對(duì)番茄灰霉病菌Botrytis cinerea的抑制率分別為100％，76.1％， 53.1％，42.8％，37.0％，33.3％；對(duì)玉米彎孢菌Curbularia lunata菌絲的抑菌率分別為：67.7％，46.9％，42.8％，38.8％，32.8％，28.9％；對(duì)番茄煤霉菌B.cinerea抑菌率分別為：87.1％，41.9％，21.0％，22.8％，11.7％，8.2％；對(duì)小麥赤霉菌Gibb