昆蟲(chóng)病原線蟲(chóng)共生菌YL001的分子鑒定及殺蟲(chóng)毒性基因的克隆.pdf

1、昆蟲(chóng)病原線蟲(chóng)共生菌是共生于昆蟲(chóng)病原線蟲(chóng)(entomopathogeic nematodes，EPNs)腸道內(nèi)的一類(lèi)細(xì)菌，在.EPNs中對(duì)昆蟲(chóng)的致病力起關(guān)鍵性作用，與線蟲(chóng)之間的關(guān)系可以概括為：線蟲(chóng)攜帶共生菌進(jìn)入寄主昆蟲(chóng)體內(nèi)，并釋放到昆蟲(chóng)的血腔中；共生菌在昆蟲(chóng)血腔內(nèi)繁殖，產(chǎn)生殺蟲(chóng)活性極高的蛋白毒素，使昆蟲(chóng)患敗血癥，一般在48h內(nèi)死亡。由于這類(lèi)殺蟲(chóng)毒素蛋白具有高效、殺蟲(chóng)譜廣和殺蟲(chóng)迅速等諸多優(yōu)點(diǎn)，從共生菌中克隆殺蟲(chóng)毒性基因用于開(kāi)發(fā)新型生物源殺蟲(chóng)

2、物質(zhì)，以延緩害蟲(chóng)對(duì)目前使用的殺蟲(chóng)物質(zhì)產(chǎn)生的抗性，已成為當(dāng)今的研究熱點(diǎn)。昆蟲(chóng)病原線蟲(chóng)共生菌已成為一類(lèi)有待開(kāi)發(fā)的生物資源，基于此，昆蟲(chóng)病原線蟲(chóng)共生菌的分類(lèi)鑒定是開(kāi)展相關(guān)研究的基礎(chǔ)。 分子鑒定：昆蟲(chóng)病原線蟲(chóng)共生菌YL001是西北農(nóng)林科技大學(xué)無(wú)公害農(nóng)藥研究中心分離得到的一株有較強(qiáng)殺蟲(chóng)活性的共生菌，其分子鑒定是根據(jù)目前已知16s tDNA基因，設(shè)計(jì)引物對(duì)P<,1>P<,2>，以YL001菌株的總DNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，產(chǎn)物大小為568

3、bp， GenBank的接收號(hào)為EF206655，此序列與GenBank登錄號(hào)為XNl6RNA0的序列相似性達(dá)99.5％。構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)，顯示與.Xenorhabdus nematophilus的親緣關(guān)系最近。昆蟲(chóng)病原線蟲(chóng)共生菌YL001與GenBank中現(xiàn)有的昆蟲(chóng)病原線蟲(chóng)共生菌同源序列進(jìn)行比對(duì)，與Xenorhabdus nematophilus的相似形高達(dá)99.5％，遺傳距離為0.5，進(jìn)一步證實(shí)了該菌株就是.Xenorhabdus n

4、ematophilus。 殺蟲(chóng)毒性基因的克?。阂訷L001為材料，根據(jù)已報(bào)道的殺蟲(chóng)毒素基因-菌毛蛋白亞基序列，設(shè)計(jì)引物對(duì)P<,3>P<,4>，以YL001菌株的總DNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，獲得特異性片斷，并將此片斷克隆到T-easy載體上，獲得了重組子pGEM-PSYL001，序列測(cè)定和分析結(jié)果表明，PSYL001閱讀框全長(zhǎng)537bp，編碼179個(gè)氨基酸，預(yù)測(cè)分子質(zhì)量和等電點(diǎn)分別為18.9ku和6.94，GenBank的接收號(hào)