輻照同種異體骨移植免疫反應(yīng)的實驗研究.pdf

1、本研究利用實驗?zāi)Ｐ托∈?，系統(tǒng)、動態(tài)地觀察與宿主免疫反應(yīng)平行的同種異體骨移植的成骨指標和免疫因子表達，并利用臨床病例研究同種異體骨移植患者成骨和宿主免疫反應(yīng)，為建立用于預測和診斷同種異體骨移植排斥反應(yīng)的細胞因子的定性和定量檢測指標和方法提供依據(jù)。 方法：一、實驗?zāi)Ｐ托∈螅喝±ッ餍∈蟮碾p側(cè)肱骨、股骨和脛骨，制成冷凍干燥脫脂脫鈣異體骨，輻照滅菌，植入15只小鼠脛前肌群內(nèi)，于移植術(shù)后1、2、3、4、5周分別將小鼠處死，切取移植骨及周圍肌

2、肉組織。另取3只未植入移植骨的昆明小鼠作對照組，切取脛前肌肉。①用ELISA法測定血清中骨鈣素(carboxyglutamic acid-containing protein，BGP)水平。②用3H-TdR摻入法測定脾淋巴細胞刺激指數(shù)。③所取組織制成石蠟切片，HE染色及白介素-1β(interleukin-1β，IL-1β)、白介素-6(nterleukin-6，IL-6)、白介素-10(ntedeukin-10，IL-10)免疫組織化

3、學染色(Immunohistochemistry,IHC)，并用Western blot法測定IL-1β、IL-6和IL-10表達，作半定量分析。④用PCR法檢測移植局部腫瘤壞死因子α(Tumor necrosisfactorα，TNFα)mRNA水平。二、臨床病例：取7例臨床骨移植患者血清，7名正常人血清作為對照，用放射免疫法分析血清骨鈣素(BGP)和腫瘤壞死因子(TNF)含量。 結(jié)論：1)植入輻照同種異體骨后1周，血清骨鈣素

4、含量升高，第2周降低到正常水平。反映了異位植骨早期成骨細胞的成骨功能活躍。2)輻照大段同種異體骨移植后5周內(nèi)脾淋巴細胞刺激指數(shù)降低。3)移植局部炎癥因子IL-1β、IL-6和TNFα在骨移植后升高，在第3周達到峰值，之后逐漸下降。4)移植局部抑炎因子IL-10在骨移植后第4周達到峰值，之后降低。抑炎因子與促炎因子的表達呈時間先后順序。5)骨移植患者血清骨鈣素和腫瘤壞死因子含量均高于正常人。血清骨鈣素和腫瘤壞死因子含量呈弱的負相關(guān)。