腎活檢組織Perforin、GranzymeB、IDO表達對早期移植腎功能異常鑒別作用的研究.pdf

1、引言： 腎移植目前已經成為終末期腎病患者主要的治療手段之一，隨著近年來移植免疫研究的不斷深入和新型免疫抑制劑的不斷問世，急性排異發(fā)生率顯著下降，一年移植物的存活率得到了明顯的提高，但是由于急性排異不僅可以引起移植物早期失功，而且對后期慢性移植物腎病和移植物長期存活有直接的影響，急性排異仍然是術后主要并發(fā)癥之一。在新型免疫抑制方案下，急性排異臨床表現(xiàn)發(fā)生了很大的變化，移植腎區(qū)疼痛、少尿、血尿、發(fā)熱、血壓升高等傳統(tǒng)表現(xiàn)多不典型，移植

2、物的常規(guī)病理活檢已經成為急性排異診斷的主要方法，但常規(guī)病理活檢存在著它自身的局限性，很難診斷術后移植腎功能異常但未達到Banff病理診斷標準的早期排異，病理與臨床診斷的不一致(約5％—10％)，如：很難鑒別術后急性排異、急性腎小管損傷、Ptc等并發(fā)癥對移植腎造成的損傷。腎移植術后近期急性排異仍然是令人擔憂的并發(fā)癥，它不僅導致免疫抑制劑上調和相關并發(fā)癥，而且術后一年內排異雖然不會導致移植腎近期失功，但30％—40％會出現(xiàn)長期的移植腎功能異

3、常，降低移植腎長期生存率。如何減少排異反應發(fā)生并能盡早發(fā)現(xiàn)排異反應，延長移植腎功能顯得尤為重要。 對病理活檢進行有益的補充，這已經成為移植界新興的課題。正是基于上述原因，我們對穿孔素(Perforin)、顆粒酶B(GranzymeB)和吲哚胺2，3-雙加氧酶(IDO)在腎移植受者活檢組織中的表達進行了研究。 材料和方法： 1.病例選擇 2001年6月～2007年7月，在本中心接受腎臟移植患者中，術后1月內

4、血肌酐較基礎值升高25％以上且移植腎活檢證實為急性排異(AR)44例；病理活檢證實為急性腎小管損傷(ATI)19例；病理活檢證實為PTC內炎細胞浸潤但未達到Banff排異診斷標準(Ptc)14例；術后1個月左右定期活檢且移植腎功能穩(wěn)定(Ts)41例。所有的移植腎活檢病理診斷均由一位專門的移植病理醫(yī)生根據Banff97和Banff2005作出診斷。以上受者均為首次移植，尸體供腎，留取活檢標本時無明顯肺部感染、尿路感染者，隨訪期間無惡性腫瘤

5、者。同時獲取118例相應病例移植時血管剛開放時(postperfusion)的活檢組織，所有標本均采用福爾馬林固定、石蠟包埋保存。 2.免疫組化的方法研究急性排異者(AR)、管周毛細血管炎細胞浸潤者(Ptc)、移植腎功能穩(wěn)定者(Ts)和急性腎小管損傷者(ATI)活檢組織穿孔素(Perforin)、顆粒酶B(GranzymeB)、IDO的表達及血管剛開放時活檢組織IDO的表達。 3.統(tǒng)計學方法： 所有數(shù)據采用SPS

6、S13.0軟件包，免疫組化的實驗數(shù)據采用均數(shù)±標準差，不同組間比較采用Mann—Whitney U Test檢驗，多樣本計量資料行方差分析及LSD檢驗(比較前行方差分析)，如方差不齊行Dunnett T3檢驗，計數(shù)資料采用卡方檢驗，確定檢驗水準為p=0.05，p<0.05時差異具有顯著性。敏感性和特異性計算分別如下：敏感性=真陽性樣本數(shù)(TP)／[TP+假陰性樣本數(shù)]；特異性=真陰性樣本數(shù)(TN)／[TN+假陽性樣本數(shù)]。 結果

7、： 1.移植術后急性排異組。IDO陽性率為86.4％，陽性積分為5.54±3.11，而這個比例跟急性腎小管損傷組(10.5％，0.79±2.42)和移植腎功能穩(wěn)定組(12.2％，0.85±2.32)相比，具有顯著性差異(P<0.0001)；管周毛細血管炎細胞浸潤組(71.4％，4.78±3.45)跟急性排異組相比，沒有統(tǒng)計學差異(P=0.233，P=0.972)；急性排異組中C4d(+)組(84.6％，5.15±3.12)和C4

8、d(一)組(88.9％，6.11±3.10)相比，沒有統(tǒng)計學差異(P=1.000，P=0.249)；急性排異組中IA型IDO陽性率和陽性積分別為(90.9％，6.00±2.97)，與IIA型(80.0％，5.50±3.50)和體液性排異(87.0％，5.35±3.12)相比，沒有統(tǒng)計學差異(P=0.722)；急性排異組中管周毛細血管C4d(+)組PTC陽性細胞浸潤率(92.3％)與C4d(一)組(55.6％)相比，具有顯著性差異(P=0

9、.008)。IDO在急性排異組、管周毛細血管炎細胞浸潤組、急性腎小管損傷組及定期活檢移植腎功能穩(wěn)定組相應的血管剛開放時活檢組織表達的陽性率與各組表達的陽性率的一致性都達到了100％。 2.移植術后急性排異組GranzymeB陽性表達率為100％，陽性細胞數(shù)為20.55±17.62，而這個比例跟急性腎小管損傷組(10.5％，0.42±1.30)和定期活檢移植腎功能穩(wěn)定組(0，0.00)相比，具有顯著性差異(P<0.0001)；管周

10、毛細血管炎細胞浸潤組(100％，12.57±6.90)跟急性排異組相比，沒有統(tǒng)計學差異(P=0.09)；急性排異組中C4d(+)組GranzymeB陽性率和陽性細胞數(shù)為(100％，23.38±18.80)和C4d(一)組(100％，16.44+15.36)相比，沒有統(tǒng)計學差異(P=o．249)；急性排異組中IA型GranzymeB陽性率和陽性細胞數(shù)為(100％，15.55±16.96)，與IIA型(100％，24.50+16.46)和體

11、液性排異(100％，21.21±18.59)相比，沒有統(tǒng)計學差異(P=o．628)。 3.移植術后急性排異組Perforin陽性表達率為100％，陽性細胞數(shù)為12.48+11.39，而這個比例跟急性腎小管損傷組(10.51％，0.34±0.93)和定期活檢移植腎功能穩(wěn)定組(0，0.00)相比，具有顯著性差異(P

12、6)；急性排異組中C4d(+)組Perforin陽性表達率和陽性細胞數(shù)為(100％，14.65±13.00)和C4d(一)組(100％，9.33±7.83)相比，沒有統(tǒng)計學差異(P=0.214)；急性排異組中IA型Perforin陽性率和陽性細胞數(shù)為(100％，7.36±4.61)，與IIA型(100％，17.60±12.04)和體液性排異(100％，13.17±12.37)相比，沒有統(tǒng)計學差異(P=O．628)。 4.作為移植

13、腎早期急性排異的診斷的指標，穿孔素、顆粒酶B和IDO的診斷敏感度都較高，分別為100％、100％和86.4％，但穿孔素、顆粒酶B的特異性(100％、100％)比IDO的特異性(77.4％)高。 結論： 1.移植腎急性排異時腎活檢組織穿孔素、顆粒酶B和IDO表達都上調，提示穿孔素、顆粒酶B和IDO參與急性排異。 2.Ptc組腎活檢組織穿孔素、顆粒酶B和IDO表達都上調，提示Ptc可能是極早期的排異反應。 3

14、.急性腎小管損傷組腎活檢組織穿孔素、顆粒酶B、和IDO表達沒有明顯上調，提示急性腎小管損傷可能為非免疫因素造成的損傷。 4.通過對血流開放后半小時左右與再次活檢的結果對照，前后一致性較好(100％)，提示IDO可能是較早期預測排異的標記物。 5.腎活檢組織穿孔素、顆粒酶B和IDO的檢測可能是術后早期排異的輔助診斷指標，并且可以把免疫因素和非免疫因素對移植腎造成的損傷加以鑒別。 6.穿孔素、顆粒酶B和IDO在C4d