N-,0-期甲狀腺乳頭狀癌頸淋巴結轉移的分子標志物研究.pdf

1、目的：cN0期甲狀腺乳頭狀癌只是臨床概念，仍有相當數量的患者術后病理證實存在淋巴結轉移。甲狀腺乳頭狀癌頸部淋巴結轉移率高而且有明顯的區(qū)域轉移傾向，文獻報道首次治療時即有60.9％的病人發(fā)生頸淋巴結轉移[1]。已有的研究證實CyclinD1、c-Met過度表達在PTC發(fā)生發(fā)展過程中可能起著重要作用。本研究旨在驗證N0期甲狀腺乳頭狀癌(PTC)頸淋巴結轉移相關的分子標志物。應用RT-PCR和FQ-PCR法檢測甲狀腺腫瘤組織中的c-Met和C

2、yclinD1mRNA表達量的高低與腫瘤的良惡性、年齡、性別和淋巴結轉移是否相關，探討甲狀腺乳頭狀癌的發(fā)生機制，研究其基因的異常表達與臨床病理學特征之間的關系，并為其早期分子診斷、臨床手術和靶基因治療提供客觀依據。 方法：研究對象為66例甲狀腺疾病患者，均無放化療史，均行手術切除。設計實驗的陽性對照組為36例甲狀腺癌病人，其中經病理證實為淋巴結轉移患者21例，無淋巴結鞘移者15例。陰性對照組為30例甲狀腺良性病變及癌旁正常甲狀腺

3、組織。采集新鮮手術切除組織標本，液氮下研磨后，提取總RNA，經反轉錄，均以β-action為內參進行PCR及FQ-PCR擴增，經2％瓊脂糖凝膠電泳檢測β-action和目的基因CyclinD1、c-MetmRNA在陰性對照組和陽性對照組中的表達。比較CyclinD1和c-Met在良性對照組、無淋巴結轉移組、有淋巴結轉移組之間的表達狀態(tài)，分析甲狀腺良惡性病變、甲狀腺乳頭狀癌間表達差異，比較甲狀腺癌病人的年齡、性別、淋巴結有無轉移與Cycl

4、inD1和c-Met表達的關系，并檢測CyclinD1和c-Met在甲狀腺乳頭狀癌中的表達有無相關關系。統(tǒng)計方法采用方差分析、t檢驗和相關分析。 結果：RT-PCR和FQ-PCR法相對定量檢測隨機選取的36例N0期甲狀腺乳頭狀癌患者和30例甲狀腺良性病變，甲狀腺乳頭狀癌組中，術后切除標本病理檢查有淋巴結轉移者20例，其頸部淋巴結轉移發(fā)生率為55.56％。術后切除的外科標本中有淋巴結轉移組c-Met和CyclinD1的表達明顯高于

5、術后外科切除標本中未發(fā)現轉移淋巴結組(P<0.05)，c-Met表達量在男性組高于女性組，小于45歲組高于大于等于45歲組，而CyclinD1的表達量在上述分組中無明顯表達差異。良惡性對照組之間，c-Met的表達量惡性組明顯高于良性對照組，而CyclinD1在兩組間無明顯差異。在惡性對照組中，c-Met和CyclinD1的表達無明顯相關關系。 結論：應用RT-PCR和FQ-PCR法檢測甲狀腺腫瘤組織中的c-MetmRNA表達量的

6、高低與腫瘤的良惡性、年齡、性別和淋巴結是否轉移具有顯著的意義。CyclinD1在良惡性對照組中表達無統(tǒng)計學意義，但是在甲狀腺乳頭狀癌淋巴結有轉移組表達量明顯高于無轉移組。以上提示c-Met、CyclinD1在轉錄水平的異常表達可能是甲狀腺乳頭狀癌發(fā)生頸部淋巴結轉移的早期分子事件。與常規(guī)病理檢測甲狀腺乳頭狀癌的包膜侵犯情況決定手術方式相比，能更早地預測腫瘤細胞的淋巴轉移，而且具有更高的準確性。本研究結果初步表明CyclinD1和c-Met