豬流行性腹瀉病毒陜西株的分離鑒定及S基因的遺傳變異分析.pdf

1、豬流行性腹瀉(Porcine epidemic diarrhea，PED)是由豬流行性腹瀉病毒(Porcine epidemic diarrhea virus，PEDV)引起的一種高度接觸性腸道傳染病，發(fā)病特征為腹瀉、嘔吐、脫水，新生仔豬的死亡率高達100％，各種年齡豬和不同品系的豬群均易感。該病于1971年在歐洲首次被報道后，不久相繼在亞洲及南美相繼暴發(fā)，給全球養(yǎng)豬業(yè)造成嚴重的經濟損失。自2010年10月開始，PED在中國東南部10余

2、個養(yǎng)豬大省暴發(fā)并迅速波及到全國，呈現出高發(fā)病率、高死亡率的態(tài)勢，死亡仔豬超過100萬頭，給中國養(yǎng)豬業(yè)造成了沉重的打擊。近幾年PED的流行范圍仍在不停的擴大，成為嚴重危害中國養(yǎng)豬業(yè)的傳染病之一，直至目前仍沒有削減的趨勢。為進一步了解豬流行性腹瀉病毒的流行特點及遺傳變異情況，加強對豬流行性腹瀉的防控，本研究對疑似PED的仔豬小腸和糞便樣品進行了PEDV的分離與鑒定，并對分離到的毒株的S基因進行了序列測定與遺傳變異分析，其主要結果如下:

3、>　　1.PEDV SX-YL株的分離與鑒定:將經RT-PCR鑒定為PEDV陽性的病料樣品處理后，接種于Vero細胞，盲傳至8代時，部分細胞開始出現皺縮、變圓、顆粒物質增多、折光性增強等CPE，對其進行TCID50測定，TCID50為10-6.125/mL。為證明該病變是由PEDV所引起，采用RT-PCR對細胞培養(yǎng)物進行了PEDVN基因的擴增，結果均為陽性。進一步進行了間接免疫熒光檢測(IFA)，結果表明，用PEDV陽性小鼠血清在PED

4、V感染24h后的Vero細胞中檢測到了病毒抗原的存在，可見到紅色熒光，而未被PEDV感染的Vero細胞，觀察不到熒光。最終確定該病毒為PEDV，將其命名為PEDV SX-YL株。
　　2.PEDV SX-YL株S基因的遺傳變異分析:對前面分離到的PEDV SX-YL株的S基因進行測序，結果表明，該毒株S基因全長為4149bp，編碼1382個氨基酸，與歐洲經典毒株CV777、韓國分離株DR13、歐洲近年流行株以及中國近年流行株的S基