腦源性神經(jīng)生長(zhǎng)因子在唾液腺腺樣囊性癌神經(jīng)侵襲和轉(zhuǎn)移中作用的相關(guān)研究.pdf

1、目的： 以SACC臨床標(biāo)本和SACC細(xì)胞系A(chǔ)CC-2及其肺高轉(zhuǎn)移株ACC-M作為研究腫瘤轉(zhuǎn)移分子機(jī)制的模型，旨在通過(guò)一系列體外、體內(nèi)實(shí)驗(yàn)觀察腦源性神經(jīng)生長(zhǎng)因子(BDNF)與SACC神經(jīng)侵襲特性的關(guān)系以及BDNF對(duì)SACC抗失巢凋亡能力、增殖能力、體內(nèi)轉(zhuǎn)移能力的影響。 方法： 1.以30例SACC標(biāo)本為研究對(duì)象，以5例正常腮腺及3例腺泡細(xì)胞癌作為對(duì)照，采用免疫組化法對(duì)BDNF和TrkB進(jìn)行檢測(cè)。以SACC高低轉(zhuǎn)移細(xì)

2、胞系A(chǔ)CC-2和ACC-M為研究對(duì)象，利用免疫組化、RT-PCR、實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western印跡檢測(cè)BDNF和TrkB在其中的表達(dá)差異。 2.以唾液腺腺樣囊性癌(SACC)高低轉(zhuǎn)移細(xì)胞系A(chǔ)CC-Metastasis(ACC-M)和ACC-2為研究對(duì)象，利用MTT、懸浮培養(yǎng)、流式細(xì)胞儀、軟瓊脂克隆形成實(shí)驗(yàn)觀察BDNF對(duì)SACC抗失巢凋亡能力、增殖能力和體外侵襲能力的影響。 3.以唾液腺腺樣囊性癌(SACC)高低轉(zhuǎn)移

3、細(xì)胞系A(chǔ)CC-Metastasis(ACC-M)和ACC-2為研究對(duì)象，利用裸鼠建立涎腺腺樣囊性癌體內(nèi)轉(zhuǎn)移模型，觀察BDNF在涎腺腺樣囊性癌轉(zhuǎn)移過(guò)程中的作用。 結(jié)果： 1.組織標(biāo)本免疫組化顯示TrkB表達(dá)水平在嗜神經(jīng)現(xiàn)象組顯著高于未見(jiàn)嗜神經(jīng)現(xiàn)象組(P<0.05)，BDNF表達(dá)水平與嗜神經(jīng)現(xiàn)象無(wú)關(guān)(P>0.05)。實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western印跡均檢測(cè)到BDNF和TrkB在ACC-M中的表達(dá)高于ACC-2(P<0.0

4、1)。 2.ACC-2和ACC-M在體外培養(yǎng)過(guò)程中均具有一定的抗失巢凋亡能力，且ACC-M高于ACC-2(P<0.01)。25ng/ml，50ng/ml，100ng/mlBDNF對(duì)ACC-2和ACC-M增值均無(wú)明顯影響(P>0.05)。50ng/ml BDNF可以明顯提高ACC-2的抗失巢凋亡能力(P<0.01)和克隆形成(P<0.01)。50ng/ml BDNF可以明顯提高ACC-2和ACC-M的體外侵襲能力(P<0.01)

5、 3.ACC-M裸鼠體內(nèi)轉(zhuǎn)移能力顯著高于ACC-2的裸鼠體內(nèi)轉(zhuǎn)移能力，ACC-2和ACC-M在轉(zhuǎn)移能力上存在差異。實(shí)驗(yàn)組(ACC-2+100ng/ml BDNF)與對(duì)照組(ACC-2)相比較，雖然在成瘤面積和所占比例上略高，但其差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論： 1.TrkB的表達(dá)強(qiáng)度與SACC的神經(jīng)侵襲特性相關(guān)。BDNF和TrkB的表達(dá)強(qiáng)度與SACC的高轉(zhuǎn)移特性相關(guān)。 2.SACC的轉(zhuǎn)移特性與抗失巢凋亡能力相